pten在实验性大鼠多囊卵巢组织中的表达及其作用.pdf

摘要 摘要 目的： 本课题拟通过多囊卵巢动物模型，探究调控卵泡生长发育的重要基因pten shRNA慢病毒载体转染在体卵巢， 在多囊卵巢组织中的表达，并利用携带pten 观察pten下调对多囊卵巢形成的影响。为深入了解多囊卵巢的致病机制增添新 资料，为临床诊疗女性相关疾病提供有价值的理论依据。 方法： 1．建立多囊卵巢综合征大鼠模型，并利用放射免疫检测血清相关激素、卵 巢组织HE染色判断造模是否成功。 2．利用免疫组化、RT．PCR、Westem blot等方法观察多囊卵巢组织中pten mRNA和PTEN的表达及变化。 3．设计、构建携带ptenshRNA的慢病毒载体，利用RT．PCR检测携带pten shRNA慢病毒载体。 shRNA慢病毒载体的沉默效率，选择抑制作用最强的pten 4．将携带pten blot等方法观察pten下调对多囊卵巢形成的影响，放射免疫同步检测血清相关 激素的变化。 结果： 1．利用炔诺酮+hCG造模法，模型组大鼠卵巢外形增大，重量极显著高于 12天对照组(P0．01)，卵巢表面出现较多囊性扩张卵泡。组织HE染色发现： 与12天对照组相比，原始卵泡数极显著低于对照组(P0．01)，窦前卵泡数极 显著高于对照组(P0．01)，窦状卵泡数明显减少(PO．01)，囊性扩张卵泡 和闭锁卵泡明显增多(P0．01)。颗粒细胞层较少，颗粒细胞排列松散甚至脱 失。血清激素检测显示LH、T、INS以及LH／FSH明显升高(P0．01)。 2．免疫组化结果显示：对照组与模型组中，PTEN蛋白在各级卵泡均有表 达，在原始卵泡主要表达于卵母细胞胞浆，在窦前卵泡、窦状卵泡以及扩张、 闭锁卵泡中主要表达于颗粒细胞。 摘要 3．RT．PCR、Westem mRNA blot结果显示：随着卵巢发育，12天对照组pten mRNA和PTEN 和PTEN蛋白含量均低于0天对照组(P0．05)，而模型组pten 蛋白含量则显著高于0天对照组与12天对照组(PO．01)。 shRNA的慢病毒载体转染各组在体卵巢，‘12天后卵巢行冰冻 4．利用pten shRNA+模型组以及空白载 切片荧光显微镜下观察GFP的表达，结果显示：pten shRNA+模型组卵巢大小、重量均显 体十模型组有明显荧光。此外，慢病毒pten 著减少，HE染色显示囊性扩张卵泡和闭锁卵泡数减少，血清激素检测显示T下 降(P0．01)。RT．PCR和Western blot结果均显示：ptenshRNA+模型组的pten mRNA和PTEN蛋白水平均显著低于模型组与空白载体+模型组(PO．01)。 结论： 1．炔诺酮+hCG造模法是制备PCOS大鼠模型的有效方法。 mRNA和蛋白在多囊卵巢组织中表达显著增强。 2．pten 3．通过携带ptenshRNA慢病毒转染，使在体卵巢pten下调后，对多囊卵巢 的形成具有抑制作用。 关键词：多囊卵巢；pten；RNA干扰；卵泡发育 ★本研究工作受国家自然科学基金、江西省自然科学基金 江西省卫生厅项目资助。 ABSTRACT Objective： studiedthe ofpten modelso