β-catenin在高氧致新生鼠BPD中的作用及机制研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 13．catenin在高氧致新生鼠BPD中的作用 及其机制的研究 刖 声 支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BPD)是采用机械通气或氧 气治疗早产儿严重心肺疾病后常见的并发症，是威胁早产儿健康和生命质量的首 要疾病。随着围产医学的不断发展，极低出生体重儿的成活率明显提高，BPD的 发病率也在不断上升，其病理特点由过去显著的肺间质纤维化转变为以肺泡发育 阻滞为突出特征。 BPD的发病机理包括：肺脏发育极不成熟，外界损伤以及损伤后修复机制的 破坏。故此，BPD的发生可简单理解为在正常肺发育过程中，外界损伤导致的肺 发育受阻和异常修复。以往的研究多着重于对肺组织损伤机制的研究，已证实氧 毒性和机械通气介导的损伤、炎症反应在BPD的发生过程中具有重要作用，但抗 炎、抗氧化的治疗对BPD却没有取得确切的疗效。随着对BPD认识的不断深入， 对于即参与正常肺发育又调控肺组织损伤修复机制的研究，成为研究BPD发病机 制的新视野。已证实肺发育过程中，位于肺泡分隔顶端的弹性蛋白不断向前延伸 发展，是肺泡逐渐形成的物质基础；而细胞外基质的异常分布、沉积则是纤维化 fibroblast．LF) 发生的直接原因。与两者的发生均密切相关的肺成纤维细胞(1ung 的作用日益受到人们的关注。LF的增殖活化是其执行生物学功能的基础，对调节 其增殖活化的信号通路的认识将有助于我们进一步理解LF的功能及其在BPD发 生中的意义。 WNT信号通路是近年来才逐渐被人们认识到的一类控制细胞生长、增殖、 传递细胞间相互调控信息的信号通路。其中wNT／D．catenin信号通路作为经典的 WNT信号通路，已成为发育生物学及肿瘤学研究的热点。大量的研究证实，此 信号通路活化的关键在于胞浆中是否存在结构稳定的lB-catenin，以及其向胞核的 转位。已有研究表明，早期肺发育(即支气管树形成)过程中WNT／[3．catcnin信 号通路发挥了重要作用；且在对成人肺纤维化疾病的研究中发现WNT／13．catcnin 信号通路可能起着关键性的作用。但在肺泡化过程中删p．catcnin信号通路是 否存在，其作用如何，在肺泡化障碍及肺纤维化的早产儿BPD中有何作用?到目 前为止，鲜有报道。既然wrcr／p．catcnin信号通路参与调节肺发育及肺纤维化， 且与细胞增殖分化有关，那么其在BPD中的作用是否通过促进LF增殖活化来实 现? 的作用及其机制，完善BPD的发病机制，为BPD的预防和治疗提供一个新思路。 实验材料与方法 一、动物模型 ℃，湿度60％--70％。每天定时开箱15rain，添水、饲料及更换垫料，并与空气 组交换母鼠以免因氧中毒而致喂养能力下降。B组置于空气中(Fi02=O．21)，余 控制因素同A组。 二、标本的采集和处理 每组分别于实验后3、7、14d随机选取8只称重，5％哥拉腹腔注射 (0．6m1／1 00mg)麻醉后，分离气管，打开胸腔，暴露心肺，经气管缓慢注入4％ 多聚甲醛，然后置于4％多聚甲醛中，4C过夜，石蜡包埋，制作4lam组织切片， 用于肺形态学观察、免疫组织化学检测。或于打开胸腔后，剪开左心耳，经右心 室插入套管至肺动脉，注入10ml生理盐水洗净肺内残血，收集肺组织，置于无 检测。 三、细胞培养 2 动物模型建立后，分别于实验第3、7、14天取每组2．3只动物进行肺组织 LF原代培养，取传2．3代细胞进行检测。 四、实验方法 1、组织水平 (1)动态观察各组新生大鼠的一般状态、监测体重。 (2)肺形态学观察：①H＆E染色；②弹性蛋白染色；③Masson染色。 muscle (3)免疫组织化学技术：a．平滑肌动蛋白(Q．smoothactin,tt．SMA)、 p-catenin蛋白检测。 (4)Western-blot法：检测肺组织[I-catenin蛋白表达。