Slug调节因子和E-cadherin在胸水腺癌细胞中表达的相互关系.pdfVIP

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目录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………8 三、论文 前言……………………………………………………………………………99日||j舌…………………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………………..10 实验结果………………………………………………………………………12 讨论……………………………………………………………………………16 结论……………………………………………………………………………17 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………18 五、参考文献………………………………………………………………………19 六、附录 综述……………………………………………………………………………22 致谢……………………………………………………………………………35 个人简介………………………………………………………………………36 ·中文论著摘要· 表达的相互关系 目 的 上皮间质转化在肿瘤侵袭和转移中扮演重要角色。EMT的关键特征之一就是 细胞连接蛋白E.cadherin的表达下调伴随间质特征的获得。 体16q21。在肿瘤的进展过程中,E.cadherin可通过多种机制功能性的沉默或失活, 包括机体突变,翻译后修饰和转录抑制。 Slug来自snail超家族,是转录因子之一。它最早在神经脊中被确认,并在人 类多种类型肿瘤中的研究都发现其下调上皮标记物,上调间质标记物以使肿瘤细 胞变得更具活动力和侵袭力。 , 胸腔积液是疾病常见并发症之一,通常可作为临床诊断的早期临床体征。我 们利用胸水提取肿瘤细胞,研究slug和E.cadherin的表达,探讨两者在肺腺癌中 表达的相关性。 材料与方法 l、材料 收集2008年12月至2010年2月中国医科大学附属第一医院门诊及病房恶性 胸水患者标本,优选以肿瘤细胞为主、炎性细胞较少未接受过治疗的121例作为 研究对象(经细胞免疫化学及临床资料证实为肺腺癌细胞)。另外28例良性胸水 标本作为对照,共计149例。其中,男性患者69例,女性患者52例;年龄26—89 岁,平均年龄56岁。 2、免疫细胞化学染色 cnlz 抗体试剂公司产品,鼠抗人vimentin抗体购自福州迈新公司销售的美国Biox公司 冲液代替第一抗体作为空白对照,DAB显色,苏木素复染。常规脱水透明,中性树 胶封片。 3、液基细胞薄层检测技术(TCT): 收集新鲜胸水20ml左右,室温下800r/min离心5分钟,弃去上清,取沉淀底层 细胞,加入清洗液后再次离心。取沉淀与保存液混合后机器Thinprep2000自动制片。 4、免疫荧光染色方法 放入4%福尔马林中固定20分钟。加非免疫动物血清37℃封闭30分钟,滴加一抗(1: 复染细胞核。50%缓冲甘油封片,荧光显微镜Nikon90i下观察并照相。孵育二抗 以后步骤均在避光条件下进行。阴性对照实验:用等量的0.Olmol/LPBS代替一 抗,其余步骤同前。结果判定:以细胞中呈现明亮的绿色荧光信号定位0ct3/4阳性。 5、WesternBlot蛋白印迹 的蛋白水平。总蛋白从胸水细胞中提取,冰上超声处理,4℃静置,孵育50min, 1:100稀释,E—cadherin1:1000稀释)4C过夜, 脱脂奶粉封闭液封闭2h,一抗(slug X底片曝光,显影,定影后拍照,以13-actin为内参,用凝胶成像及分析系统 (BiolmagingSystems,美国)分析蛋白各条带的灰度值,每组结果均为相同条件 重复3次。Western and

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