不同凋亡水平T细胞来源的ALD—DNA对抗双链DNA抗体产生的影响.pdf

维普资讯 《现代免疫学~2007年第 27卷第 2期 不 同凋亡水平 T细胞来源的ALD—DNA对抗双链 DNA抗体产 生的影响 温振科 ，曹清华，徐林，徐薇，储 以微，熊思东 (复旦大学免疫生物学研究所 ，复旦大学上海医学院免疫学系，上海 200032) 摘要 ：研究不同凋亡水平 T细胞来源的ALD-DNA(activatedlymphocyte_derivedDNA)对抗双链 DNA抗体产生的影响。用 尼龙毛柱法分离小 鼠脾脏 T细胞 ，分别提取不 同凋亡水平 T细胞 的DNA定义为未凋亡 ALD-DNA、低凋亡水平 ALD- DNA、中凋亡水平 ALD-DNA和高凋亡水平 ALD-DNA，并免疫 同系BALB／c小 鼠；用 ELISA方法检测血清中 IgG类抗双 链 DNA抗体的水平及其亚型；用考马斯亮蓝法检测免疫小 鼠尿蛋 白的含量 。结果显示 ，ALD-DNA 的凋亡水平与其诱导 产生 的抗双链DNA抗体水平成正相关 ，二者的相关系数 r一0．852；不同凋亡水平 的ALD-DNA诱导的抗双链 DNA抗体均 以IgG1为主，但 IgG2a和 IgG2b的水平在高凋亡 ALD-DNA免疫组有 明显增高；低凋亡 ALD-DNA、中凋亡 ALD-DNA和 高凋亡 ALD-DNA免疫小鼠均有显著蛋 白尿形成 ，并且高凋亡 ALD-DNA免疫组的尿蛋白含量有 明显增高 。该结果表 明， 高凋亡水平的ALD-DNA免疫同系小鼠更易诱导高水平的致病性 IgG类抗双链DNA抗体产生，凋亡DNA可能在系统性红 斑狼疮 (SLE)发生发展过程 中发挥 了重要作用 ，这为我们能更加深入的理解 SLE的发生机制提供 了有力的实验依据 。 关键词 ： 凋亡 ；DNA；抗双链 DNA抗体 中图分类号 ：R392．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—2478(2007)02—0093—06 SLE是一种好发于青年女性 ，而且危害严重 SLE发病过程中具有重要的作用 ]，因此 ，我们 的 自身免疫性疾病 ，其血清学特点是有多种抗核抗 推测在淋巴细胞活化过程中伴随的细胞凋亡可能在 体的产生，尤其是抗双链 DNA抗体 的产生 J， 抗双链 DNA抗体的诱导产生中具有重要作用 。基 在SLE发病过程中发挥重要作用 3『“J。然而 ，目前 于此 ，本实验中我们进一步用 ConA活化诱导的不 人们并不清楚诱导抗双链 DNA抗体产生的具体机 同凋亡水平 的T细胞 DNA免疫同系小鼠，观察其 制，我们实验室经过长期对 SLE发病机量 的研究 对抗双链 DNA抗体产生的作用 ，以利于更加深人 发现 ，与未活化的淋 巴细胞 DNA相 比，ConA活 的探讨抗双链 DNA抗体诱导产生的免疫学机制以 化的淋巴细胞 DNA(ALI)-DNA)能够诱导 同系小 及 SLE的发病机制 。 鼠产生抗双链 DNA抗体 ，并在正常 BALB／c小 鼠 1 材料与方法 上成功地诱导 出了SLE模型 5『]，这提示我们活化 的淋 巴细胞DNA可能是诱导抗双链 DNA抗体产 1．1 材料 生的重要免疫原之一 ，而淋 巴细胞的活化过程导致 1．1．1 动物 6～8周龄雌性 BALB／c小鼠购 自中 的其 DNA免疫 原性发生改变 ，则是推动抗双链 科院上海实验动物中心，清洁级饲养。 DNA抗体产生的关键因素 。 1．1．2 试剂 刀豆蛋 白A(ConA，Sigma)；蛋 白 然而 ，ALD-DNA诱导抗双链 DNA抗体产生 酶 K(Merck，German)；S1核酸酶 (TaKaRa，Ja- 的具体原因仍不清楚 ；我们知道，在淋巴细胞活化 pan)；RnaseA、小牛胸腺 DNA(Sigma)；福 氏不 过程 中不可避免的伴随着细胞凋亡的发生，近来很 完全佐剂和完全佐剂 (北京鼎 国公司)；羊抗小 鼠 多研究提示细胞的大量凋亡以及凋亡细胞 的清