沉默乙酰肝素酶基因对腺样囊性癌细胞侵袭和迁移能力的影响.pdfVIP

第 33卷第 10期 南京医科大学学报 (自然科学版) 2013年 1O月 ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience) ·1383· 沉默乙酰肝素酶基因对腺样囊性癌细胞侵袭和迁移能力的影响 王 新，龚中坚，於 俊 (南京医科大学附属无锡市人民医院口腔科，江苏 无锡 214023) [摘 要] 目的：探讨 siRNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase，HPA)基因对人腺样囊性癌SACC—M细胞侵袭和迁移能力的影 响。方法：根据人HPA基因序列设计并合成质粒表达载体转染至人涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma，SACC)细 胞 ，采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)和Westernblot检测转染前后 HPAmRNA和蛋白的表达变化 ，选出对 HPA沉默效果 最佳 的质粒 ，获得稳定表达细胞株。通过划痕损伤实验和Transwell小室细胞侵袭实验检测RNA干扰沉默HPA表达后对 SACC．M细胞侵袭和迁移能力的影响。结果：重组质粒pGPH1／GFP／Neo／HPA—siRNA显著降低HPAmRNA和蛋 白的表达水平， 干扰组中穿透Transwell小室基质的SACC—M细胞数明显低于对照组 (P0．05)，划痕损伤实验结果显示，干扰组与对照组细胞 迁移距离比较，24、48h内差异有统计学意义 (P0．05)。结论：沉默人 SACC．M细胞中HPA的mRNA和蛋白表达，可抑制 SACC．M细胞的侵袭和迁移能力。HPA可能是治疗人类涎腺腺样囊性癌的一个新靶点。 [关键词] 腺样囊性癌；基因沉默；乙酰肝素酶；侵袭；转移 [中图分类号] R739．8 [文献标志码]A [文章编号] 1007．4368(2013)10—1383—05 doi：10．7655／NYDXBN Roleofheparanasegenesilenceontheinvasionandmigrationofhumansalivaryadenoid cysticcarcinomacells WangXin，GongZhongjian，YuJun (DepartmentofOralandMaxillofaeialSurgery，WuxiPeople’HospitalAffiliatedtoNJMU，Wuxi214023，China) [Abstract]Objective：Toinvestigatetheroleofheparanase(HPA)genesilencingbymiRNAinterferenceoninvasionandmigration ofSACC—M cells．Methods：Expression vectorsofrecombinantplasmidsexpressing artificialHPA miRNA were constructed and transfectedtoknockdownHPA expression inSACC—M cells．ExpressionsofHPA mRNA andproteinweredetectedbyRT—PCR and Westernblot，respectively．Matrigelinvasionassayand scratch—wound assaywereperformedtoexaminetheinvasiveand mirgation abilityoftheSACC—M cells．Results：TransfectionofrecombinantplasmidofpGPH1／GFP／Neo／HPA—siRNA significantlysuppressed theHPA mRNA andproteinlevels．ThisknockdownsignificantlyinhibitedtheinvasionandmirgationofSACC—M cellsascompared withcontrols．Conclusion：HPA mayplayan impo~antroleininvasionandmigration inhumansalivaryadenoid cysticcarcinoma ceilsandshouldbeconsideredasapotentialsmallmoleculeinhibitortherapeu