《人细胞周期素D1和B1真核表达载体的构建及对HeLa细胞的转染》.pdf

矗变 ■变 突变 -- --—- Vo1 囝■日 ． 23 NO．5 人细胞周期素D1和 Constructionofeukaryotic B1真核表达载体的 expressionvectorsofcyclinDI 构建及对HeLa细胞 andcyclinBIandtransfection 的转染 intoHeLacells 熊 伟 ／陈贵元 ／何 敏 ／ 马明星 ／余 敏 ／谭德勇 XIONG Wei，2 CHEN Gui-yuan 2 HE Min ， ， f1．云南大学生命科学学院，云南 昆明 650091； MA Ming-xing1 YU MiD1，TAN De--yong1’ ， 2．大理学院基础医学院，云南 大理 671000) f1．CollegeofLfieSciences,YunnanUnivers~ Kunming650091； 2．CollegeofBasicMedicine,DaftUniversity,Daft 671000,Yunnan, Ct~a) 【摘要 】目的：构建人细胞周期素cyclinD1和cyclinB1的真核表达载体，并将其瞬时转染到HeLa细胞株中。方法：以HeLa细 胞总RNA为模板，通过RT—PCR扩增cyclinD1和cyclinB1基因编码的cDNA，并将扩增的cDNA片段插入p3XFLAG—CMVMT-14真核表 达载体 ，分别构建p3XFLAG—cyclinD1和p3XFLAG—cyclinB1重组质粒，重组子经酶切分析和测序鉴定后，用脂质体介导的基因瞬 时转染法 ，将重组正确 的表达载体转染HeLa细胞 ，用Western—blot技术检测细胞中FLAG融合蛋白的表达。结果 ：经酶切鉴定和 Western印迹分析证实人cyclinD1和cyclinB1的真核表达载体构建成功，并能在瞬时转染的HeLa细胞中表达分子量大小相符的重组 蛋白。结论：成功构建了人cyclinD1和cyclinB1的真核表达载体，为两种细胞周期素及其相关蛋白的功能研究奠定了基础。 【关键词】细胞周期素；载体构建；瞬时转染；真核表达 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1004—616X(2011)05—0330—05 doi：10．3969~．issn．1004—616x．2011．05．002 [ABSTRACT] oBJECTIVE：ToconstructeukaryoticexpressionvectorswithFLAGepitopethatcanhighly expresshumaneyclinD1andcyclinB1genes．thentransientl