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《人细胞周期素D1和B1真核表达载体的构建及对HeLa细胞的转染》.pdf
矗变 ■变 突变 --
--—- Vo1
囝■日 . 23 NO.5
人细胞周期素D1和 Constructionofeukaryotic
B1真核表达载体的 expressionvectorsofcyclinDI
构建及对HeLa细胞 andcyclinBIandtransfection
的转染 intoHeLacells
熊 伟 /陈贵元 /何 敏 /
马明星 /余 敏 /谭德勇
XIONG Wei,2 CHEN Gui-yuan 2 HE Min ,
,
f1.云南大学生命科学学院,云南 昆明 650091; MA Ming-xing1 YU MiD1,TAN De--yong1’
,
2.大理学院基础医学院,云南 大理 671000)
f1.CollegeofLfieSciences,YunnanUnivers~ Kunming650091;
2.CollegeofBasicMedicine,DaftUniversity,Daft
671000,Yunnan, Ct~a)
【摘要 】目的:构建人细胞周期素cyclinD1和cyclinB1的真核表达载体,并将其瞬时转染到HeLa细胞株中。方法:以HeLa细
胞总RNA为模板,通过RT—PCR扩增cyclinD1和cyclinB1基因编码的cDNA,并将扩增的cDNA片段插入p3XFLAG—CMVMT-14真核表
达载体 ,分别构建p3XFLAG—cyclinD1和p3XFLAG—cyclinB1重组质粒,重组子经酶切分析和测序鉴定后,用脂质体介导的基因瞬
时转染法 ,将重组正确 的表达载体转染HeLa细胞 ,用Western—blot技术检测细胞中FLAG融合蛋白的表达。结果 :经酶切鉴定和
Western印迹分析证实人cyclinD1和cyclinB1的真核表达载体构建成功,并能在瞬时转染的HeLa细胞中表达分子量大小相符的重组
蛋白。结论:成功构建了人cyclinD1和cyclinB1的真核表达载体,为两种细胞周期素及其相关蛋白的功能研究奠定了基础。
【关键词】细胞周期素;载体构建;瞬时转染;真核表达
中图分类号:Q785 文献标识码:A 文章编号:1004—616X(2011)05—0330—05 doi:10.3969~.issn.1004—616x.2011.05.002
[ABSTRACT] oBJECTIVE:ToconstructeukaryoticexpressionvectorswithFLAGepitopethatcanhighly
expresshumaneyclinD1andcyclinB1genes.thentransientl
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