计算机辅助构建组织工程肝脏仿生三维血管网络的研究.pdf

复旦大学博士论文 计算机辅助构建组织工程肝脏仿生三维血管网络的研究 中文摘要 第一部分 骨髓源性间充质干细胞的分离、培养、鉴定和分化 stemcells MSCs)体外 目的：探讨小鼠骨髓源性间充干细胞(mesenchymal 培养、鉴定、分化的方法，研究间充质干细胞在体外环境下向内皮细胞分化的效 率和功能变化。 方法：分离小鼠股骨、胫骨，肝素抗凝，冲出骨髓，以Percoll密度梯度离 心法与贴壁培养法联合分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞。我们通过MTT法 抗体通过流式细胞仪检测骨髓问充质干细胞表面标志。通过以地塞米松、胰岛素 等诱导P3代MSC向脂肪细胞分化，诱导后，以油红染色鉴定分化的脂肪细胞。 以VEGF诱导MSC向内皮细胞分化，以CD34、KDR等内皮细胞表面标志鉴定 诱导后的内皮细胞。 结果：(1)密度梯度离心结合贴壁培养法分离细胞，细胞接种12h后，可 见有圆形或椭圆形细胞贴壁，72h后出现散在的纺锤状贴壁细胞，细胞培养10 天后，出现致密的贴壁细胞层，此时细胞的两极开始有规律地排列成柬状。(2) CD45则都低于8％。(3)骨髓干细胞P3向脂肪细胞诱导后，加入油红O染液显 示细胞内有橙红色脂肪滴呈现。(4)骨髓干细胞经血管内皮因子诱导诱导一周时， 有散在的鹅卵石样细胞出现。诱导两周后，形成致密的贴壁细胞层，大部分细胞 呈圆形或卵形形，细胞呈“铺路石”样排列。CD34、KDR阳性率分别为89．24 率为89．83±4．49％。同时，诱导后的内皮细胞在体外保持良好的成管能力。 结论：密度梯度离心法结合贴壁培养法可以在体外分离、培养出高纯度骨髓 间充质干细胞。骨髓问充质干细胞在体外经过传代培养后，依旧具有多向分化潜 能。 关键词：骨髓间充质干细胞；内皮细胞；血管内皮生长因子。 第二部分 可降解Poly(EC—CL)电纺膜的制各和表征 复旦大学博士论文 目的：以己内酯和碳酸亚乙酯为原料合成可降解高分子聚合物聚己内酯． 方法：以甲苯为溶剂，通过稀土配合物Nd(DBMP)3催化碳酸亚乙酯和CL 开环共聚合。N-MR检测聚合物化学结构，FTIR傅里叶全反射红外光谱分析聚 合物中特征集团的变化。以六氟异丙醇为溶剂，EC／CL共聚物比例为1：9，1：6， 1：4的Poly(EC．CL)共聚物为原料，分别制备不同浓度的电纺膜，通过扫描电镜 (SEM)观察纺丝膜的纤维形貌。力学性能测试检测各组电纺膜的拉伸强度、杨 氏模量和断裂伸长率。 结果：从共聚物Poly(EC．CL)红外图谱证实聚合物为酯类聚合物，通过 核磁共振图谱没有发生EC单体的均聚合和脱C02副反应发生，所得共聚物为 而EC／CL浓度为1：6和1：4时，不能形成有效电纺纺丝。力学性能测试发现 随着EC含量的增高，聚合物拉伸强度、屈服强度和杨氏模量逐渐下降，而断裂 伸长率随EC含量增高而增大。 种力学性能可调控的新型可降解高分子材料。 关键词：聚己内酯．碳酸亚乙酯，静电纺丝，扫描电镜 第三部分 Poly(EC．CL)／VEGF电纺膜片的制备及生物学性能检测 目的：以合成高分子材料Poly(EC．CL)和血管内皮生长因子VEGF为原料， 利用静电纺丝技术构建具有良好细胞相容性和机械性能的纳米支架。 mong／g、lug／g的溶液，电压15kV，流速2ml／h电纺纳米纤维支架。扫描电镜 检测电纺膜纳米形态，细胞增殖试验、Live／Dead细胞试剂盒检测试验、细胞黏 附试验、LDH释放试验、间接接触溶血试验、皮下植入试验检测电纺膜细胞相 容性和血液相容性。Poly(EC．CL)电纺膜诱导分化MSCs试验检测电纺膜内 VEGF体外分化MSC的能力。 复旦大学博士论文 纤维形态没有分别，纳米纤维直径在440-J：55nm，我们增加VEGF含量，纤维直 径没有明显变化(p0．0