姜黄素对人肝L-02细胞胆固醇合成及转运蛋白表达的影响.pdfVIP

主要英文缩略语索 英文缩写 英文全拼 中文名称 NAFLD non-alcohol fatty liver disease 非酒精性脂肪肝病 FFA free fatty acids 游离脂肪酸 TC total cholesterol 总胆固醇 TG trigelyceride 甘油三酯 CE cholesteryl ester 胆固醇酯 HDL high density lipoprotein 高密度脂蛋白 LDL low density lipoprotein 低密度脂蛋白 VLDL very low density lipoprotein 极低密度脂蛋白 DEPC Diethy Pyrocarbonate 焦炭酸二乙酸 PBS phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 DMSO Dimethyl Sufloxide 二甲基亚砜 HPLC high performance liquid chromatography 高效液相色谱 1 姜黄素对人肝L-02 细胞 胆固醇合成及转运蛋白表达的影响 研究生：程静屏 导 师：阳学风教授 专 业: 消化内科 中 文 摘 要 目的：研究姜黄素对人肝 L－02 细胞脂滴形成、胆固醇合成限速酶－HMG-CoA 还原酶和转运蛋白 Caveolin-1 表达及细胞内胆固醇、胆固醇酯含量的影响，了 解姜黄素对肝细胞胆固醇合成及转运的作用。 方法：取正常人肝 L-02 细胞，和经 50％胎牛血清造模 24 小时建立的脂变 肝细胞模型，共同作为研究对象。实验分为 7 组：第一组为空白对照，即正常肝 细胞组；第二组为脂变肝细胞组；第三组至第六组在脂变细胞中分别加入不等量 姜黄素，使姜黄素终浓度分别为 0、12.5umol/l、 25umol/l、50umol/l 和 100umol/l；第七组为阳性对照组，即脂变肝细胞加入普罗布考，使其终浓度为 50umol/l；第八组为正常肝细胞加 50umol/l 姜黄素对照组。每组加药后继续孵 育 24 小时。油红 O 染色观察每组细胞内脂滴的形成情况。高效液相色谱法（HPLC） 检测细胞内胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯(CE)的含量，并计算细 胞内 CE/TC 比值及培养基FC 含量。RT-PCR 法检测每组肝细胞 HMG-CoA 还原酶及 转运蛋白 caveolin-1 mRNA 水平的表达，从而确定姜黄素降低细胞 CE 的最佳浓 度，作出量效关系。然后以姜黄素的最佳浓度处理细胞不同的时间，即 0 小时、 6 小时 、12 小时、24 小时，再分别检测各组细胞 HMG-CoA 还原酶和 caveolin-1 mRNA 水平的表达，高效液相色谱法检测细胞胆固醇含量，确定姜黄素降低细胞 CE 的最佳时间，作出时效关系。实验数据以 ±s表示，用 SPSS13.0 统计软件 对数据进行统计分析，以 P0.05 作为差异显著性标准。 结果：经 50％胎牛血清孵育24 小时后，倒置显微镜下可观察到 L－0