海蜇胶原蛋白理性质及其胶原肽的护肤活性研究.pdf

海蜇胶原蛋白理化性质及其胶原肽的护肤活性研究 海蜇胶原蛋白理化性质及其胶原肽的护肤活性研究 摘要 海蜇是一种大型的食用水母，在我国有着广泛的资源分布，具有很高的经济 价值、营养价值和药用价值。本论文以黄海海域的新鲜海蜇为原料，采用生化分 离技术提取纯化未变性胶原蛋白，研究其理化性质；采用酶工程技术，开发海蜇 伞部胶原蛋白梯级肽制品，并以多种体外活性体系确定胶原肽的抗氧化能力。研 究不同分子量胶原肽对小鼠B16黑色素瘤细胞黑素合成的影响及作用机制，以及 胶原蛋白和胶原肽对紫外线诱导的皮肤光老化模型小鼠的保护作用。本研究对于 进一步丰富胶原蛋白的应用领域，开发海蜇新的食(药)用功效，推进海蜇产业 链的发展提供科学依据。 1．对海蜇化学成分组成测定发现，鲜活海蜇水分达96％以上，干物质含量 低于5％。海蜇伞部中粗蛋白、总糖、脂肪、灰分及羟脯氨酸含量分别占干基的 和1．1％。海蜇蛋白质主要由肌原纤维蛋白和碱不溶性蛋白质组成。 2．以海蜇伞部为原料，通过采用不同提取方法提取胶原蛋白，并对所提取 的胶原蛋白的部分理化性质进行测定。以胶原蛋白的提取率为指标，生物酶法的 提取率最高，溶剂预处理化学法和高压辅助物理法提取率相差不大。酶法制备的 未变性胶原蛋白鉴定为I型胶原。氨基酸分析发现，胶原蛋白中Gly含量最高， 于脊椎动物I型胶原al链，分子量为115KDa；胶原蛋白含糖量为2．8％，符合无 脊椎动物胶原蛋白特点；热变性温度和热收缩温度分别为28．8℃和51．6。C，均低 于牛皮I型胶原；红外光谱说明胶原蛋白保留了大量的三股螺旋结构；溶解性表 明海蜇胶原蛋白的等电点为p16而在pH3时有最大溶解度，酸性条件下盐浓度高 于4％时，胶原蛋白的溶解度急剧下降。 3．以羟自由基抑制率和水解度为指标，确定海蜇胶原蛋白的水解用酶，并 采用响应面方法分析最适酶解条件。结果显示，胰蛋白酶水解条件为pH7．8，水 解温度为48．8℃、酶与底物比为3．5％，此条件下，水解产物的羟自由基抑制率 海蜇胶原蛋白理化性质及其胶原肽的护肤活性研究 为71．87％，水解度为14．69％；碱性蛋白酶properaseE水解条件为pH9．1，水解 温度为47．3℃、酶与底物比为2．8％，此条件下，水解产物的羟自由基抑制率为 79．07％，水解度为17．89％。复合酶水解显著提高水解液清除羟自由基的能力和 水解度，复合酶的最佳水解条件为碱性蛋白酶和胰蛋白酶混合水解，温度48．0℃， 酶与底物的比值分别为2．8％和3．5％，pH9．1，水解时间3h，此条件下，水解产 物的羟自由基抑制率为94．24％，水解度为24．32％。从三种水解产物的分子量大 小和氨基酸组成来看，单酶水解的平均分子量主要集中在2000Da左右，复合酶 水解的平均分子量在700Da左右；三种水解产物氨基酸组成没有明显不同，富 含Gly和Pro，总疏水性氨基酸含量在35％左右。 4．以海蜇胶原蛋白复合酶水解液为原料，超滤获取三个不同分子量组分 多指标、多体系评价了不同分子量组分的抗氧化特性。结果显示，JCH3具有强 的还原力和脂质氧化抑制能力，并对超氧阴离子具有较高的清除能力，三种体系 与浓度均呈正相关性，其中对超氧阴离子的抑制率与浓度呈线性关系；JCH2对 羟自由基和过氧化氢活性氧清除效果明显，并体现出较好的铜螯合能力，量效关 系明显。水解液中氨基酸的组成和分子量的大小直接影响其抗氧化能力的大小。 5．通过体外培养小鼠B16黑素瘤细胞株，探讨了不同分子量胶原肽组分 种胶原肽对细胞生长无任何影响(P0．05)，体现了胶原肽无细胞毒性。胶原肽 降低了38．8％。从作用机制来看，相对于其它两组分，JCH2表现出较高的抑制 从而抑制酪氨酸酶的表达。 6．通过紫外线诱发小鼠皮肤光老化模型，研究胶原蛋白和胶原肽对紫外线 损伤的调节作用。结果显示，两者能有效地缓解紫外线照射引起的光老化程度， 胶原肽表现的生理活性高于胶原蛋白。胶原蛋白和胶原肽显著提高光老化模型的 ll 海蜇胶原蛋白理化性质及其胶原肽的护肤活性研究 胸腺指数和脾指数，防止免疫器官的萎缩，延缓衰老。胶原蛋白和胶原肽能够提 时降低MDA含量(PO．05，P0．01)，从而缓解紫外线照射引起的体内氧化压力。 胶原蛋白和胶原肽能有效调节皮肤水分、胶原蛋白、脂质、神经酰胺及糖胺聚糖 的