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上海海洋大学硕士论文 DNA检测法评价基质中食用菌菌丝的相对生物量 摘要 生长是所有生物的重要生命过程，大多数动植物的生长和发育过程都可以肉 眼清楚地分辨、观察，用个体的大小和重量准确衡量，而在食用菌的营养生长阶 段，由于菌丝与培养基质的混合特性，菌丝生长状况通常只能以诸如“菌丝浓密、 稀疏、洁白、整齐等非量化的词汇进行描述，无法准确地量化表示其生长状况。 食用茵菌丝体在培养基质上进行一系列的生命代谢活动，测定基质中食用菌菌丝 的生物量一直存在着一系列的技术难点。本实验通过检测DNA含量来衡量基质 中食用茵菌丝的相对生物量，主要采用间接法测定培养基质中食用菌菌丝的相对 生物量。 本实验分别以香菇135及金针菇FV菌株为试验材料，评价相应基质中其菌 丝的相对生物量。 首先通过系列的筛选工作，确定了标准培养菌丝的DNA含量检测系统(在试 图构建稳定的标准曲线的预实验期间，筛选合适的培养基和标准的菌丝培养方 法，确定了DNA提取方法及提取系统)，构建了稳定的菌丝生物量与DNA含量 的标准曲线(分别构建了香菇和金针菇的标准曲线)，标准曲线具有线性度高(R2 0．99)，重现性好，测定误差较小的优点。香菇135标准培养菌丝提取的DNA p 含量为6．11±0．34 g／rag，金针菇FV标准培养菌丝提取的DNA含量为36．49 ±0．83ug／mg。实验同时发现菌丝的数量和质量均会受到培养基质的细微变化 和传代培养的影响。对于要建立稳定的测定菌丝生物量的标准曲线而言，选用成 分稳定的PDB合成培养基较好。同时发现香菇和金针菇菌丝的DNA含量不同， 即在评价待测样品时，需针对该种类构建相应的标准曲线。 其次，由于食用菌菌丝培养基质都是农作物废弃物，本身可能含有不同水平 的DNA量，故对本实验条件下香菇和金针菇的相应基质DNA本底进行了测定。 结果显示，不同的培养基质它们的DNA本底值不同，每nag香菇135培养料的 ll DNA含量为0．689_+0．080 g，而每mg金针菇FV培养料的DNA含量却为0．522 ±0．044IIg。在测定不同培养基质中菌丝的生物量之前，都需先测定相应基质 的本底DNA含量，以便于得到真实的菌丝生物量。 再次，就食用菌菌丝培养基质对菌丝DNA提取的影响进行了研究，将标准 培养菌丝与相应培养基质按一定比例混合，检测混合物的DNA含量，确定了本 上海海洋大学硕士论文 实验条件下香菇和金针菇的相应基质对菌丝DNA提取的影响分别为0．030± 0．032和0．030±0．013。这表明，培养基质不同，基质本底值可能相同，但对于 不同真菌DNA提取的影响率不同。 最后，以此为基础，对香菇135三角瓶培养物和从浙江丽水采回的香菇135 菌棒中的菌丝相对生物量进行了评价。同样对从上海高榕农业有限公司采回的金 针菇Fv不同生长阶段的菌瓶中的菌丝相对生物量进行了测定，由得到的数据建 立培养料中DNA消长的模型。至此，对基质中菌丝在不同生长时期的相对生物 量变化有了初步的了解。 本研究是首次采用检测DNA含量方法评估食用菌菌丝生物量，在构建方法的 同时衡量了检测实验的误差范围(不同的重复之间单点实测误差范围小于18％， 实验测定的平均误差范围小于3％)。相较于之前微生物的生物量评价困难、没 有系统可靠的检测方法、无法估计误差范围等状态，这个方法的构建为培养基质 中微生物生物量的准确评价提供一种新的思路。 关键词：香菇135，金针菇，茵丝相对生物量，基质干扰 Ⅱ 上海海洋大学硕士论文 EvaluationTheRelative BiomassOf Edible Mycelial Fungi InCultureMediumDNA