裂褶菌F17锰过氧化物酶的分离纯化及对偶氮染料脱色研析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 本实验室分离得到一株产锰过氧化物酶的白腐真菌-裂褶菌F17 (Schizophyllum sp．F17)。前期的研究表明，该菌对偶氮、蒽醌、三苯甲烷和 杂环等不同结构类型的多种合成染料显示出较强的脱色能力。本实验中以松木屑 力培养基，裂褶菌F17经过固态发酵，产生以锰过氧化物酶为主的胞外酶。具体 研究内容与结果如下； 凝胶过滤层析等步骤，分离纯化得到电泳纯的锰过氧化物酶。最终锰过氧 化物酶的比活力为9．2，活力回收率为3．8％。通过SDS·聚丙烯酰胺凝胶 电泳检测，锰过氧化物酶的相对分子量为48，7kDa，锰过氧化物酶的等电 点为3．60。使用苯酚．硫酸法测得该酶的含糖量为18％。使用Edman降解 方法，测得锰过氧化物酶的N．末端氨基酸序列为VTCPDGVNTATN AAA。以DMP作为底物，测得锰过氧化物酶的最适反应pH和最适反应 oC。25 温度分别为pH6．g和35 oC时，锰过氧化物酶在pH4-7的缓冲溶 液中保温1h活力十分稳定。锰过氧化物酶在25。C，pH4．5下，以Mn2+， 47．8和122．9 lmaol／L。检测了多种化学物质对锰过氧化物酶的活力的影 氧化物酶的活力无明显影响，A矿在所试浓度范围内强烈抑制锰过氧化物 酶的活力，Fe2+和Fe3+高浓度时强烈抑制锰过氧化物酶的活力。其他金属 离子中，Na+高浓度时对锰过氧化物酶的活力有所抑制，K+，A13．和M矿 在所试浓度范围内对镭过氧化物酶的活力无影响，Ca2+和Mn2+高浓度时 能够促进锰过氧化物酶的活力，抑制剂中，Ⅸrr和亚铁氰化钾在所试浓 度范围内均完全抑制锰过氧化物酶的活力，EDTA和NaN3高浓度时对锰 过氧化物酶的活力高度抑制，硫脲在所试浓度范围内对锰过氧化物酶的活 力微弱抑制。纯化的锰过氧化物酶能够有效地对3种偶氮染料刚果红、金 橙G和橙黄IV进行脱色，测得的初始脱色率分别为7．74，1．61和1．38 mg L-l min-1。 (2)实验分别采用海藻酸钠、明胶和壳聚糖作为载体，并以戊二醛为交联剂， 裂褶菌F17锰过氧化物酶的分离纯化及其对偶氮染料脱色的研究 通过包埋．交联和吸附·交联2种耦合固定化方法制各固定化锰过氧化物 酶。探讨了锰过氧化物酶的不同固定化条件和固定化酶的部分性能。锰过 氧化物酶的3种耦合固定化方法的适宜条件分别为：海藻酸钠包埋．交联 固定化中，海藻酸钠的浓度为l％，戊二醛的浓度为3％，CaCl2的浓度 为0．1 mL， mol／L明胶吸附·交联固定化中，明胶微粒与酶液的比值为l∥1 戊二醛的浓度为0．2％，交联时间为10min；壳聚糖吸附．交联固定化中， 使用浓度为3％的壳聚糖制作微球，戊二醛的浓度为O．2％，壳聚糖微球 与酶液的比值为1．4 mL，交联时间为70min。3种锰过氧化物酶的耦 g，1 合固定化，活力回收率分别达到了70％、67％和64％。与游离酶相比， 制备的3种固定化酶最适反应pH分别由7．0降低到5．0、5．0和3．0，最适 oc、55 反应温度分别由35。c升高到75 oc和75oc。3种固定化锰过氧 2．2．1l 化物酶的耐热性都显著提高，其中用壳聚糖制成的固定化酶在pH 的宽范围内表现出很好的酸碱耐受性。30oC连续测定6-9次酶活力，