利用黑线鳕和狭鳕加工副产品制备胶原的表征及其功能评价.pdfVIP

利用黑线鳕和狭鳕加工副产品制备胶原的 表征及其功能评价 手两 要 海洋动物胶原蛋白，特别是鱼皮胶原逐渐受到人们的关注。由于鱼类属于变 温动物，与哺乳动物胶原相比拥有独特的氨基酸组成，因此鱼皮胶原蛋白有若干 特殊性质。为了使以水产加工的副产品得到充分的利用，本文以廉价易得的水产 加工下脚料黑线鳕(Melanogrammusaeglefinus)和狭鳕(Theragrachalcogramma)鱼 皮为原料，提取了酸溶胶原(Acid—solublecollagen，ASC)。通过对多种预处理和提 取方法的对比选择出了优化的制备方法。利用酸和酶作为催化剂研究了ASC的 水解与产物分子量之间的关系。并利用小鼠和鸡胚以及毛发为模型，分别研究了 两种鱼皮酸溶胶原及其部分水解物的体内和体外功能特性。 除机械剪切以外，分别用微波处理和超声波的预处理方法，在三种温度条件 下用乙酸溶液对黑线鳕和狭鳕鱼皮原料进行ASC提取。经比较产率和产品的性 质特征，优化的制备条件为，半时间歇超声处理120S，20℃下用0．5M乙酸溶 液提取，两种鱼皮ASC的产率分别达到15．05％和13．11％，产品符合胶原的典型 特征且纯度较高，原有结构保持较好。 对制得的黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC进行了基本性质表征，紫外光谱显示二者 分别在233nm和230nm处有最大光吸收。傅立叶变换红外光谱表明所提取的两 种胶原保持了原有的螺旋结构。氨基酸组成显示黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC的甘氨 酸分别达21．1％和19．8％，羟脯氨酸分别约占7．8％和6．9％，组成与其它一些鱼 类ASC有相似之处。通过凝胶电泳分析，确定两种胶原由至少2种不同的Gt肽 链组成，均被鉴定为I型胶原蛋白。此外，黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC的热变性温 度相差不大，均较陆生动物低，并显示出与羟脯氨酸含量的相关性。 利用三种不同浓度酸和三种不同的蛋白酶分别对黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC进 kDa和 行水解。黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC的酸水解物分子量范围分别是3．5．53．4 2．6．46．4 kDa。黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC酶水解物的平均分子量范围分别是6．8．37．1 kDa和5．9．31．2kDa。酶促水解中，酶活性、反应时间和水解物平均分子量的关 系比酸水解复杂，酸水解更具有随机性，生成物平均分子量稳定。从两种鱼皮胶 原的酸水解物中，选择两组具有平均分子量由大到小梯度的水解物1．4与两种 ASC共同进行功能评价。 体内功能实验中，黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC及水解物1和2显示出明显的止 血功能和促凝功能，其中，黑线鳕鱼皮ASC及其水解物1分别缩短凝血时间达 合实验中，黑线鳕鱼皮ASC及其水解物最高可缩短小鼠外伤愈合时间达30．4％， 狭鳕及其水解物1也分别缩短愈合时间26．1％和21．7％。 烫伤修复实验中，两种鱼皮ASC及各自水解物均显示出一定的积极作用但 程度不同，其中用各自较低分子量的水解物3和4处理过的小鼠皮肤组织修复迹 象最明显。血管生成实验表明，黑线鳕鱼皮ASC及其水解物l和狭鳕鱼皮ASC chorioallantoic 的处理对鸡胚尿囊膜(Chickembryo membrane，CAM)有促进血管 生成的作用，其主要方式是促进CAM中毛细血管床的血管分支及小血管发生， 且对胚胎未见毒害作用。 体外功能实验中，黑线鳕鱼皮ASC的低分子量水解物3和4经处理lh后的 头发在强度和拉伸率上有较明显的改善。狭鳕鱼皮ASC的低分子量水解物则需 对头发处理2h以上才有效。体外凝血实验中，黑线鳕和狭鳕鱼皮ASC均对凝 血形态有显著影响，引发形成纤维状凝血块，其各自的大分子量水解物l形成与 之类似但体积更小的凝血块。两种鱼皮ASC均在离体皮肤保湿中显示出良好性 能，保湿性随平均分子量降低而下降。类似的，ASC及其水解物的吸水性和吸 油性也随平均分子量的降低而下降。 关键词：胶原；水解；止血；血管生成；保湿 and characterizationandfunctional Preparation