农杆菌介导BADH基因转化马铃薯的耐盐研究.pdf

摘要 摘要 本研究以马铃薯品种费乌瑞它的脱毒微型薯为外植体，利用农杆菌介导法将BADH耐盐 相关基因导入马铃薯，经PCR和Southern检测，证明BADH基因己转入马铃薯基因组中。 同时对遗传转化的影响因素激素种类与浓度、脱菌抗生素种类与浓度、共培养时间、筛选方 式等进行了优化。 试验对转BADH基因费乌瑞它进行耐盐性鉴定，结果4个转基因株系与对照相比叶片相 对含水量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性三个指标差异显著。主要研究结果如下： ZT。 1薯块再生培养基确定为MS+lmg／LIAA+2mg／L 2农杆菌菌液浓度为OD600=0．7，侵染时间为5min时，转化效果最佳，费乌瑞它薯块出 芽率分别为90．00％，污染率12．50％。 3共培养时间对愈伤组织诱导率影响很大，薯块最佳共培养时间为2d。 4对脱菌抗生素的浓度进行了比较试验，进口头孢噻肟钠对农杆菌LBA4404菌株有效抑 制浓度为200mg／L，且在有效抑制浓度下对外植体无不良影响，并且可以有效抑制农杆菌的 滋生。 5试验采用延迟一周的筛选方式，抗性选择剂为草丁磷(PPT)，结果表明薯块芽诱导阶段 PPT浓度为5mg／L，生根阶段的PPT浓度为4mg／L。 株阳性信号，说明基因已经整合到马铃薯基因组中。 转BADH基因费乌瑞它后代的生物学鉴定 对Southern杂交呈阳性的植株进行抗盐性试验，植株生长期间分别用Nacl浓度为O．3％、 0．5％、O．7％、O．9％的盐水浇灌进行比较试验，植株在Nael浓度为O．7％时生长正常。 生理检测结果表明，转基因株系平均叶片相对含水量比对照高出非转基因植株10．43％， SOD活性比对照高出1．32倍，对照植株MDA含量则高于转基因株系8．87％。综合以上结果， 说明BADH基因在4个转基因株系均已表达，提高了马铃薯转基因株系的耐盐性。 关键词：马铃薯；遗传转化；BADH基因：耐盐性 Abstract TransformationofPotatowith Agrobacterium··mediated S BADH altResistanceGene Abstract mainlocal Inthis Wastransferredinto cultivars，with study,BADH Favorite，one gene method．The weremicrotuberdiscs．The wel_e explants transgenicplants agrobacterium-mediated PCRandSouthern wereconfmaedtobe inthe of tested by blotting,andthey integratedgenome factorsBADHfrom BADHintothe transciption potato． potato，Stress-related orychophragmus，put availablefor established several A system