农杆菌介导的AtMYB44基因的水稻遗传转化.pdfVIP

农杆菌介导的 AtMYB44 基因的水稻遗传转化 摘要 水稻是最重要的粮食作物之一。 培育抗逆品种是水稻品种选育的重要目标。 近年来， 植物转基因技术的发展为培育高效抗逆水稻品种开辟了新的途径。A tMYB44基因是一种 来源于拟南芥的新型高效抗逆基因。本研究以皖粳 97 为研究材料，在优化水稻转基因 技术体系的基础上，用农杆菌介导法将 AtMYB44 基因导入水稻，获得对非生物胁迫有 抗逆性的水稻。主要研究结果如下：  1．以皖粳 97 为转化材料，绿色荧光蛋白 gfp 基因为报告基因，除草剂 bar 基因为 选择标记基因，对影响农杆菌介导水稻的遗传转化因子进行优化。通过观察愈伤组织荧 光表达情况，分析菌液浓度、共培养温度与共培养时间对农杆菌转化水稻的影响。结果 表明，在 OD 值为 0.1、共培养21~23℃黑暗条件下，农杆菌与水稻愈伤共培养72 h， 660  最有利于水稻的遗传转化，该条件下皖粳 97  愈伤组织荧光表达率达到 70.9 %。  2．按上述优化体系，以bar基因为选择标记基因，通过农杆菌介导法，将AtMYB44  基因转入水稻皖粳 97 中。经 4 mg/L 草胺磷筛选获得 680 个抗性愈伤组织，转化率为  63.79%。经分化生根，最终获得 352 株除草剂抗性的独立转化植株。以 AtMYB44 特异 引物及 bar特异引物对抗性转基因植株进行 PCR检测，结果显示有 160株为阳性，目的 基因阳性率为 45.5%。S outhern杂交分析表明外源基因AtMYB44 已经整合到水稻基因组 中。 关键词：水稻；转基因；根癌农杆菌；AtMYB44基因；抗逆境 I  Genetic TransferringAtMYB44 gene into  RiceMediated byAgrobacteriumtumefaciences  Abstract  Rice is one of the most important crops. Plant transgenic technology is a useful method  to breed stress­resistant rice. In recent years，plenty ofgenes conferring to stress resistantence  have been isolated and widely applied. AtMYB44 is a new effective stress­resistant gene from  Arabidopsis  thaliana.  Based  on  optimizing  the  transgenic  rice  technical  system,  we  transformed  AtMYB44  gene  into  Japonica  rice  Wanjing  97  through  Agrobacterium  tumefaciences. The main results were as follows:  1. To improve the Agrobacterium­mediated transformation frequency of Japonica rice  Wanjing 97, we optimized the factors which may influence rice genetic transformation, and  analyzed the impacts of innoculum OD , coculture temperature and coculture duration on  660 transformation using gfp gene by monitoring fluorescence ofGFP. Our results showed that the  op