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第一节 DNA克隆 一、基因克隆（分子克隆molecular cloning） 通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。 二、基因克隆的核心---体外重组(Recombination) 人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。 （一）目的DNA片段的获得 从mRNA合成cDNA：逆转录酶 PCR 人工合成 从基因文库中筛选： 基因组文库、 cDNA 文库 PCR技术的发明 1983年, Mullis发明了PCR技术 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术 Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。 原理 在微量离心管中, 加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸，耐热的多聚酶, 一对合成DNA的引物, 通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环, 每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍, 一般样品是经过30次循环, 最终使基因放大了数百万倍 。 PCR产物是介于引物的5’端之间的双链DNA片段。 1、反应体系： 模板（template） 引物（primers） Taq DNA 聚合酶 dNTP 反应缓冲液（Mg2+） 2、反应影响因素：