化橘红种质资源的随机扩增多态性DNA分析.pdfVIP

维普资讯 广州中医药大学学报 2008年7月第 25卷第4期 350 Journal ofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine July2008，Vo1．25，No．4 文章编号 ：1007—3213 (2008)04—0350—05 化橘红种质资源的随机扩增多态性 DNA分析 林 励 。 欧剑锋， 肖凤霞， 刘晓涵 (广州中医药大学，广东广州 510405) 摘要：【目的】考察产地、有性繁殖对化州柚遗传特征的影响。 【方法】通过对不同产地和不同品系的化州柚与柚的随机扩 增多态性 (RAPD)分析，建立化橘红种质资源的DNA指纹图谱，计算不同样品间的遗传距离。 【结果】不同产地和不同 品系的化州柚与柚间的遗传距离指数 (D值)在0．01～064之间。 【结论】产地改变、有性繁殖等都可能诱导化州柚遗传 特征 出现变异。 关键词 ：化橘红； 种质分析 ； DNA指纹法 中图分类号：R284．1 文献标识码 ：A 中药化橘红为芸香科植物化州柚 Citrusgrandis 物技术有限公司)。 T‘omentosa’或柚Citrusgrandis(L．)Osbeck的未 1．3 药材 毛橘红、光橘红等样品均来 自广东化 成熟或近成熟的干燥外层果皮。前者习称 “毛橘 州市、广州市 (移栽品)以及广西陆川市 (见表 红”，后者习称 “光橘红”。化橘红气芳香，味苦、 1)，并经广东省中药研究所丘金裕主任 中药师鉴 微辛 ，归肺、脾经，具散寒，燥湿，利气，消痰等 定。 功效，用于风寒咳嗽，喉痒痰多，食积伤酒 ，呕恶 1．4 DNA提取 称取样品干燥叶片约 150mg，加 痞闷 j。其中毛橘红产于广东化州，为道地药材。 石英砂研磨，按试剂盒使用说明方法进行。用酶标 毛橘红质量研究的报道较多 2 j，但尚未见化橘红 仪进行浓度测定，并以15g／L琼脂糖凝胶电泳观 随机扩增多态性 DNA (RAPD)系统研究的报道。 察提取结果的优劣。 本研究对不同栽培品系与不同产地的化州柚和柚作 1．5 DNA扩增体系 反应体积为25 L，其成分 了RAPD分析，初步阐明了其亲缘关系。现报道如 为：25mmol／LMgCI21．5 L 、10txmol／L 弓I物 下 1．2txL、2mmol／L脱氧核苷三磷酸 (dNTPs) 2．5 L、10倍 buffer缓 冲 液 2．5txL 、Taq酶 1 材料与方法 0．3 L、80ngDNA 样 品。循 环 参 数 为 94cc、 1．1 仪器 BS110型电子天平 (德 国Sartorius)； 4min，随 后 94℃、1min，35℃、1min，72℃、 DYY-6C型电泳仪 (北京市六一仪器厂)；15CSR 2min，43个循环 ，最后72℃、7min。 型冷冻高速离心机 (美国Beckman)；2400型聚合 1．6 扩增程序的筛选 对扩增程序进行筛选，分 酶链反应 (PCR)仪 (美国PE)；Q—R型纯水仪 别以35cI二、37cI二、39cI二、42℃不同的退火温度 以 (法国Millipore)；GDS7600型凝胶成像仪 (英国 及35、40、43次不同的循环次数进行筛选，选择 UVP)；SpectraFLUORplus多功能酶标仪 (瑞士 扩增效果好的条件进行实验。 TECAN)。 1．7 反应体系的条件筛选 1．2 试剂 GoidVoew染料 (北京赛百盛生物工程 1．7．1 DNA浓度的测定以及模板浓度的筛选 用