3a与3b表位联抗原的口蹄疫鉴别诊断elisa的研究.pdfVIP

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2016-02-20 发布于贵州
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3a与3b表位联抗原的口蹄疫鉴别诊断elisa的研究.pdf

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3a与3b表位联抗原的口蹄疫鉴别诊断elisa的研究

目录哪Y㈣2哪2㈣9㈣5哪7洲2舢9 目录摘要……………………………………………………………………………………………．．I 英文摘要………………………………………………………………………………………．III 前言……………………………………………………………………………………………．．1 1．1口蹄疫及其危害…………………………………………………………………………．．1 1．2近年来口蹄疫亚洲流行现状……………………………………………………………一l 1．3口蹄疫病毒非结构蛋白及其功能………………………………………………………一3 1．3．1前导蛋白酶(Lpro)…………………………………………………………………一3 1．3．2 2A、2B和2C…………………………………………………………………………………………………4 1．3．3 NSP3A和NSP 3B……………………………………………………………………．4 1．3．4 3C蛋白酶(3C9m)…………………………………………………………………．5 1．3．5 3D聚合酶(3Dp01)…………………………………………………………………．6 1．4表位鉴别诊断技术研究进展……………………………………………………………。6 1．5研究的目的和意义…………………………………………………………………………8 2材料与方法……………………………………………………………………………………9 2．1材料………………………………………………………………………………………9 2．1．1菌株、质粒和血清…………………………………………………………………．．9 2．1．2主要酶类及试剂……………………………………………………………………。9 2．1．3主要仪器………………………………………………………………………………9 2．2试验方法………………………………………………………………………………～10 2．2．1表位的选择及引物的设计…………………………………………………………．10 2．2．2 PCR反应扩增3A、3B片段………………………………………………………．．10 2．2．5目的蛋白的表达和Westernblot鉴定………………………………………………14 2．2．7特异性试验…………………………………………………………………………17 2．2．8敏感性试验…………………………………………………………………………17 2．2．9重复性试验…………………………………………………………………………17 2．2．10与3种同类商品化试剂盒的比较…………………………………………………18 2．2．1lFMDV r-3AB串联肽间接ELISA方法的初步应用………………………………．18 2．2．12奶液样品检测的的探索……………………………………………………………18 3结果与分析…………………………………………………………………………………．．19 3．13A、3B短肽基因的PCR扩增结果………………………………………………………19 3．2串联肽重组表达载体的构建……………………………………………………………19 I 东北农业大学农学硕士学位论文 3．3串联蛋白在大肠杆菌中的诱导表达和纯化……………………………………………．20 3．3．1串联蛋白的诱导表达………………………………………………………………20 3．3．2串联蛋白的纯化……………………………………………………………………．21 3．4串联蛋白的westernblot鉴定‘……………………………………………………………．22 3．5牛FMDV抗体闻接ELISA方法的建立及标准化………………………………………24 3．5．1r3AB．ELISA相关条件的确定…………………………………………………………24 3．5．2r3