hp-prrs感染仔猪胸腺细胞凋亡的鉴定及凋亡相关因子mrna表达水平的检测.pdf

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2016-02-20 发布于贵州
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hp-prrs感染仔猪胸腺细胞凋亡的鉴定及凋亡相关因子mrna表达水平的检测

中文摘要…………………………………………………………………………………………………．I 英文摘要………………………………………………………………………………………………．．III l前言……………………………………………………………………………………………………………………………………．．1 1．1猪繁殖与呼吸综合征概况………………………………………………………………………．1 1．1．1病原学………………………………………………………………………………………．．1 1．1．2分子生物学特点……………………………………………………………………………。2 1．1．3致病机制……………………………………………………………………………………。5 1．1．4流行病学……………………………………………………………………………………。7 1．1．5临床和剖检变化……………………………………………………………………………．．7 1．1．6防控和疫苗…．．．………………………………………………………………………………8 1．2PRRSV与凋亡……………………………………………………………………………………．9 1．2．1凋1三：…………………………………………………………………………………………………………………………9 1．2．2PRRSV诱导的凋亡…………………………………………………………………………10 1．2．3 PRRSV感染与胸腺损伤……………………………………………………………………．11 1．3研究目的和意义…………………………………………………………………………………1l 2材料与方法……………………………………………………………………………………………13 2．1HP．PRRSV感染仔猪胸腺中感染与凋亡细胞的鉴定…………………………………………13 3 2．1．1病毒株…………………………………………………………………………………………1 2．1．2主要仪器和试剂……………………………………………………………………………．．13 2．1．3组织样本……………………………………………………………………………………．．13 2．1．4免疫荧光双标记检测PRRSV和凋亡细胞………………………………………………。13 2．1．5免疫荧光双标记检测凋亡细胞类型………………………………………………………14 2．1．6免疫荧光双标记检测PRRSV感染细胞类型……………………………………………．．14 2．2猪凋亡相关因子荧光定量PCR方法的建立…………………………………………………。15 2．2．1主要试剂和仪器……………………………………………………………………………．15 2．2．2实验动物……………………………………………………………………………………15 5 2．2．3试验设计……………………………………………………………………………………．I 2．2．4样品采集及处理…………………………………………………………………………．．．。16 SYBR Greenl 2．2．5猪凋亡相关因子及内参p-actin qRT-PCR检测方法的建立………………16 2．2．6样品检测………………………………………………………………………………………………………………。18 8 2．2．7数据分析……………………………………………………………………………………．1 3结j畏……………………………………………………………………………………………………………………………………19 3．1HP．PRRSV感染仔猪胸腺中凋亡细胞的鉴定……………………………………………………19 3．1．1免疫荧光双标记检测PRRSV和凋亡结果………………………