ibv在cek胞传代过程中s1基因变化的研究.pdf

摘要 本试验研究了IBV呼吸型强毒株M41在原代鸡胚肾细胞(CEK)中传代适应过程中，其 重要免疫原蛋白基因s1的序列变化规律。将IBVM41鸡胚第六代毒E6在CEK细胞中连续传 E6、CEK 30代后，然后将M41 载体，转化入lYd5 a大肠杆菌感受态中，随机挑选阳性质粒进行序列测定，并通过DNASTAR 及DNAsIS软件进行序列比较与分析． 试验结果表明：CEK细胞各代适应毒与鸡胚毒E6相比Sl基因核苷酸与氨基酸的同源性 较高，分别高达99．4％和98．7％以上，且CEK各代次细胞毒之间S1基因的核苷酸与氨基酸 的同源性亦较高。sl基因核苷酸与氨基酸的进化树分析可知E6、F1、F4同属一组，亲缘关 系较近；而FIO、F15、F20、F25和F30同属一组，有较近的亲缘关系。与M41E6相比，C既 各代适应毒Sl基因累计有27个核苷酸的突变．进而导致有16个氨基酸被取代。综观这些 突变，几乎在每一代中都有发生，且变化分布在整个S1基因中，没有明显的区域性，大多 数变化是随机的没有规律性，只有1020和1465两处核苷酸有渐变过程，即从FIO代开始， 分别由T取代G，T取代A，相应的在S1蛋白上的340位氨基酸由苯丙氨酸取代亮氨酸，489 位氨基酸由酪氨酸取代天冬酰胺。可见CEK细胞适应毒的优势毒是在4-10代之间形成的， 。 酸分别为苯丙氨酸和酪氨酸。 ’ 关键词：鸡传染性支气管炎病毒；CEK细胞；传代；适应；S1基因；变化规律 V on Variationof$1GeneoflBV Serial Study During inCEKCellCultures Passages Abstract Inthis the order inthe of experiment,wechronological spike study genotypicchanges protein strainM41ofavianinfectious its toa chick virus(IBv)duringadaptationprimaryembryokidney theM41 5tlaiOofIBV cell(cEK)．Wepropagated embryonicpassage(E6)forthiny passages 011CEKcell．TheS1 ofvirusfrom cell serially gene E6,CEKpassage clonedinto vecterand I(F1)’4(F4)，IO(FIo)，15(F15)，20口20),25(F25)，30(F30)WaSpMDl8-T transformed intoEcoliDH5nstrain．therecombinamsselected were positive