ibdv配体表p22p221多肽合成功能鉴定及对cef细胞文库的筛选.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 Bursal 鸡传染性法氏囊病(Infectious Disease，IBD)是感染鸡的高致病性并具有接触性 的传染病。鸡的法氏囊是该病毒侵染的靶器官。IBDV经典毒株可感染3到6周龄的雏鸡， 造成免疫缺陷，进而引起其它病原的感染，出现高死亡率，导致养禽业的巨大经济损失。IBDV 基因组编码5种病毒蛋白，其中，VP2是IBDV的主要结构的蛋白，具有重要的作用。根据 目前对IBDVVP2蛋白的研究，结合VP2蛋白的空间立体结构，本课题组设计合成了一系 列VP2多肽。对该系列VP2配体多肽进行了筛选和鉴定，证实多肽P22是IBDV的配体结 合表位，对多肽P22深入分析，得到多肽P22的主要显效部分P221，并具有和多肽P22相 同作用。实验设计合成多肽P22和P221，在DT40细胞进行配体表位的研究，进一步应用 配体表位多肽和病毒进行受体筛选。 本试验为深入研究多肽的生物学功能及用于IBDV的受体研究，用多肽合成仪固相合成 验来验证P22／P221多肽的生物学功能，证明了本次多肽合成的正确性。 统分别进行在DT40细胞上的结合试验和病毒阻断结合试验，检测合成多肽在雏鸡B淋巴细 胞系(DT40细胞)上的作用效果。试验结果初步说明：多肽P22和多肽P221能够有效地 结合DT40细胞，且随着多肽浓度的变化，结合率也随之相应变化。经病毒阻断细胞结合实 验发现，多肽P22和多肽P221依然能够有效和DT40细胞结合，但是比起细胞结合试验结 能够结合，对深入了解IBDV病毒与靶细胞的相互作用具有一定意义。 为研究IBDV病毒与靶细胞的相互作用基础，筛选靶细胞与IBDV的作用分子，分别使 eDNA T7原核表达文库进行三轮筛选，亲和噬菌体的滴度基本稳定。IBDV筛选三轮的噬菌 106 体滴度分别为：5．3×103pfu／mL、3．7×106pfu／mL、1．7Xpfu／mL，投入产出比分别为1．9 Phage—ELISA年I!噬菌斑印迹法初步证明了亲和噬菌体表达蛋白与病毒之间的相互作用。挑 选可与IBDV病毒结合的亲和噬菌斑进行PCR扩增测序。经Blast软件分析，由IBDV作为配 为97％；由混合多肽作为配体筛选出来的亲和噬菌体外源插入序列位于原鸡胶原蛋白I型仅2 链的mRNA上，其最高同源性为97％。这些序列表达蛋白可能会是CEF细胞上的IBDV病毒 受体结合位点，为下一步深入研究IBDV病毒受体表位奠定了基础。 本试验成功合成IBDV的配体结合表位多肽P22和P221，并证实其可同CEF细胞有效 VI 中文摘要 结合。通过结合试验和病毒阻断结合试验表明多肽P22和P221可有效和DT40细胞结合， 并证明IBDV病毒可阻断多肽和DT40细胞的结合。进一步分别应用配体表位多肽和病毒对 CEF细胞cDNA I7原核表达文库进行筛选，得到阳性克隆若干，并筛选出两条序列，待深 入研究。 关键词：IBDV；配体表位：噬菌体文库；受体 VII Abstract Abstract Bursal a infectiousandtransmitted IBD(InfectiousDisease，IBD)ishi曲ly diseaseforchickens．刀}ebursaofFabriciusisthe ofthisvirus，Classical targetorgan inlmune IBDVstrainscouldinfectchick