hmme联合h-ne激光对犬乳腺肿瘤细胞线粒体膜电位和atp酶的影响.pdf

摘要 摘 要 光动力学疗法是激光技术、光导技术、光信息处理技术、生物光化学技术和现代医学技 术有机结合的产物，是肿瘤治疗的新技术。它与传统手术、放疗和化疗三大治疗肿瘤疗法相 比，有极大的优越性。犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种肿瘤性疾病。犬乳腺肿瘤与人类乳 腺癌有很多相似之处，是作为人乳腺肿瘤研究的出色的模型。HMME联合632．8nm的He-Ne 激光诱导体外犬乳腺肿瘤细胞凋亡，并取得了明显效果。但凋亡的机理仍存在许多问题有待 深入研究。线粒体途径是细胞凋亡的重要途径之一，光动力学疗法通过光敏剂产生活性氧诱 导细胞凋亡，HMME-PDT是否造成犬乳腺肿瘤细胞线粒体损伤至今尚未报道，线粒体在 HMME．PDT治疗中损伤程度及在诱导凋亡中所起的作用还不清楚。 本实验选用自然发生乳腺肿瘤病例的转移灶分离培养的细胞系CHMm，用H】帆联合 632．8 肿瘤细胞形态学变化；用TUNEL末位法检测细胞凋亡；考马斯亮蓝检测细胞内总蛋白的含量： 采用荧光显微镜检测HMME在细胞内的分布：采用Regand染色法对线粒体进行染色，光镜下 观察HMME．PDT对犬乳腺肿瘤细胞线粒体损伤情况；通过提取线粒体DNA与琼脂糖凝胶电 泳观察HMME-PDT对犬乳腺肿瘤细胞线粒体DNA损伤情况；通过线粒体膜电位变化检测、 线粒体Ca2+转运能力的测定及线粒体ATP酶活性的检测，观察线粒体结构和功能的损伤情况。 实验结果显示：HMME-PDT能诱导犬乳腺肿瘤细胞出现空泡化，使细胞脱落死亡，并具 有时间依赖性。单独光敏剂和单独激光在不同程度的抑制细胞的增殖，呈现增殖缓慢，密度 增加较小。HlVIME．PDT实验组处理后，犬乳腺肿瘤细胞出现明显的凋亡形态；细胞核浓染， 固缩，出现致密浓染的颗粒状强荧光，3h后出现统计学差异(尸0．05)，6 h后差异极显著(尸 0．01)。HMME主要分布在细胞质中，细胞核周围区域荧光较强，光敏剂分布较多。细胞质 中线粒体被染成蓝色颗粒，线粒体聚集越多染色越深，HMME．PDT实验组从3h开始细胞质 染色逐渐变浅，细胞质被染色的颗粒成分随时间增加，越来越少，整个细胞着色变浅，细胞 裂的条带，实验组从3h开始亮度开始增强，条带变宽，并在24N最亮。流式细胞仪检测线粒 通过本实验的研究得出以下结论：HMME—PDT能诱导犬乳腺肿瘤细胞质内出现空泡，细 胞停止增殖并死亡脱落：单独光敏剂和单独激光对犬乳腺肿瘤的杀伤作用较弱。HMME．PDT 诱导犬乳腺肿瘤细胞发生凋亡，随处理后时间延长杀伤效应增加。HMME在犬乳腺肿瘤细胞 系中主要分布在细胞质中，在细胞核周围分布较多；实验组细胞代谢在逐渐减弱；HMME．PDT 损伤肿瘤细胞线粒体，使线粒体数目下降，线粒体膜电位降低，线粒体ca2+转运能力下降， 线粒体Na+．K+．ATP酶和Ca2+．ATP酶活性都显著降低，导致线粒体功能损伤。 关键词乳腺肿瘤细胞系；HMME；He-Ne激光；线粒体膜电位；ATP酶 Abstract onMitochondrialofCanineBreastCancer Study Damage CellInducedHMME·-PDT by Abstract anewtreatmentforcancer tocombinethe Photod)7namictherapy(PDT)WaS patients，owing and as medical of wellthe laser,light photochemicaltechnologies，as application guidingbio