ibrv对牛单巨噬细胞表达细胞因子的影响.pdfVIP

摘 要 牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotracheitis，IBR ）是一种牛的具有潜伏 感染和持久感染特点，并能引起牛多系统感染的急性接触性传染病。本试验从牛外周 血分离培养单核巨噬细胞，并对其进行形态学观察和流式细胞术鉴定；应用绝对荧光 定量PCR 方法检测牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus ， IBRV ）在单核巨噬细胞内的增殖规律；通过相对荧光定量PCR 方法对牛单核巨噬细 胞体外感染IBRV 后，0、6、12、24 及48h 时表达IL-4 、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-ɑ 等细胞因子mRNA 转录水平进行分析。试验结果如下： （1）通过密度梯度法分离培养的贴壁细胞，经过形态学观察和流式细胞术鉴定， 确认为单核巨噬细胞。 （2 ）IBRV 感染体外培养的单核巨噬细胞后，在前6h 增殖最快，之后增殖相对 比较缓慢，在96h 达到峰值，之后随着时间的增加，IBRV 在巨噬细胞中的含量开始 降低。 （3 ）IBRV 感染体外培养的单核巨噬细胞后，可以显著降低IL-4 、IL-6 和IL-8 的mRNA 转录水平（P0.05 ）。 （4 ）IBRV 感染体外培养的单核巨噬细胞后，可以显著升高IL-10 及TNF-ɑ的 mRNA 转录水平（P0.05 ）。 本试验通过检测 IBRV 感染单核巨噬细胞后，IL-4 、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-ɑ 等细胞因子表达水平的动态变化，分析IBRV 对牛单核巨噬细胞免疫学功能的影响， 为进一步研究IBRV 致病机理提供依据。 关键词：IBRV；单核巨噬细胞；流式细胞术；细胞因子 The Effects of IBRV on Expression of Cytokine of Bovine Monocyte-Macrophage Abstract Infectious bovine rhinotracheitis （IBR ）can cause multiple system acute contagious disease with character of latent and persistent infections. This study separated and cultured adherent cells from bovine peripheral blood and then identified them by morphological observation and flow cytometry. The proliferation mechanism of IBRV in mononuclear macrophage was detected by absolute fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR); The transcriptional level of IL 4, IL - 6, IL - 8, IL-10 and TNF - ɑ, were analyzed by relative fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) after bovine mononuclear macrophage being infected with IBRV 0,6,12,24 and 48h in vitro. The results are as follows: (1) The cultured adhere cells separated by density gradient separation method were identified as mononuclear macrophages by morphological observation and flow cytometry. (2) After 6h whi