应用rnai技研究捻转血矛线虫hc38基因的生物学功能.pdf

摘要 Hc38基因在捻转血矛线虫肠上皮微绒毛内高丰度表达，据推测它的表达产物是一 种重要的功能蛋白，与其吸血和免疫逃避机制有关，但对其功能研究的相关内容尚未见 报道。该基因表达产物的196-512位氨基酸构成的保守结构域属于功能未知的蛋白家族 中的14种为人类或动物的重大血源性疫病病原或传播媒介。本研究将Hc38基因表达产 基因的表达，对其生物学功能进行探索性研究，为寻找该基因产物保守结构域的功能阻 断剂，并为揭示含有该结构域的蛋白家族的功能奠定基础。 本研究首先从新疆石河子市屠宰场采集经形态学鉴定为捻转血矛线虫的雌性成虫， 对，表明所克隆的Hc38基因片段与所报道的捻转血矛线虫Hc38基因相应序列高度同源， 同源性达99％。目前该序列已登录在GeneBank上，登录号为DQ414466。 主菌HTll5中，经IPTG诱导表达后，通过饲喂方法导入捻转血矛线虫三期幼虫体内， 24h后，将干扰组和对照组分别感染绵羊，感染量为每只羊7万条，于感染后第21、23、 孵化，第35天杀羊取胃，对雌雄成虫数、雌雄虫畸形率等进行统计，并对雌雄虫虫体 长度进行测定。 结果表明，人工感染干扰组幼虫的绵羊体内捻转血矛线虫虫卵、虫卵孵化率，雌虫 畸形率为15．2％，雄虫畸形率为83．3％，而对照组雌虫畸形率仅2％，雄虫未发现有畸形 个体。 综上所述，推测Hc38基因受到抑制后可能造成捻转血矛线虫吸血不足，营养不良， 影响了个体发育，进而造成产卵数减少，孵化率降低，这与澳大利亚学者Hartman等所 预测的该基因可能与吸血或免疫逃避的推论相吻合；推测引起上述变化的原因可能是 Hc38基因影响了其相关器官及组织的正常功能；若要确定Hc38基因的生理生化功能尚 须做进一步深入研究。 关键词：捻转血矛线虫；Hc38基因；RNA干扰 Abstract is inintestinalmicroviHiofHaemonchusis Hc38 contortus．Itspcc-ulated geneabundantlyexpressed thatits with isavery function havearelationblood and products importantprotein,whichmay feeding innntme researchofitsfunctionhaven’tbeen escaping mechanism,however,the reportedyet．ne conserveddomainof196．512ammoacid tothefunction-unknownProtein belongs Familypf04910．71 ofthis were in d／slributein45 14ofthese proteinsequences lo昭edGeneBank,they species，and family aresevereblood sourcesormediumsofhumanoranimals．inthis RNAi species plague being research，by cDNA ofconserveddomainofHc38 was RNAi technique，thesegment expzessionproductscloned，the functionof wa