桑树变异株系da扩增多态性研究.pdfVIP

摘 要 以桑树变异株系的幼叶为试材，采用RAPD技术进行PNA耋套性分析， 研究了变异性状差异的分子水平上的原因。变异株系包括新一之濑(2x)、 新一之濑的辐射诱变，4021来源于秋水仙碱对新一之濑的诱变，305来源 于秋水仙碱对新一之濑诱变处理后形成的混倍体无性嫁接分离，4021A来 源于4021的芽变，4032来源于Co”Y射线对707的辐射处理。这些变异株 存在着枝条、叶片、抗病性等方面的差异，而且能够在无性繁殖系中稳定 保持。 在用91个引物单独扩增和57对引物混合扩增后，有73个单引物和38 ， 对混合引物扩增如了条带。(结果分析如下： l在新一之濑的二倍体和四倍体之间，在同一倍数体的不同株系之间 均没有发现存在条带的差异，说明桑树诱变和加倍过程中遗传物质基本上 是稳定的，仅有极少的位点发生了变化，四倍体和二倍体规律性的性状变 异可能与基因剂量效应有关。 2新一之濑三倍体305与二倍体、四倍体比较有4条特异性条带。707 的四倍体4032与707比较有1条特异性条带，表明它们之间的性状变异可 能与遗传物质的变化有关。 3新一之濑和707两个品种在DNA多态性方面存在着差异。在扩增 出条带的73个单引物和38对混合引物中，扩增条带存在差异的有49个， 占44．15％，条带没有差异有62个，占55．85％。在扩增出的431条带中， 83％，707有39条特异带，占 新一之濑有5l条特异带，占总条带数的ll V 9 12％。说明它们代表的两个种之间有 05％，两者共同条带341条，占79 较大的相似性。 4对桑树的RAPD反应条件进行了优化，找到了桑树RAPD反应较为 稳定的体系，比较了退火温度对扩增结果的影响。 5证明了RAPD反应中引物单独使用和混合使用的结果是完全不同 的，引物的混合比例不同，扩增结果亦不相同，表明了引物混合使用的可 行性。也表明RAPD反应中反应物的竞争对结果显著的影响。 6．本研究为桑树诱变和性状表达研究提供了DNA分子标记方面的证 据，进～步回收、纯化、克隆、测序这些特异性的片段，将有望找到一些 与桑树优良性状基因连锁的分子标记，为桑树的标记辅助选择育种和品种 改良奠定基础。』¨ 、，～。 关键词： 桑树 变异株系 RAPD VI 致谢 首先感谢我的导师楼程富教授，在学业上，导师渊博的知识和丰富的经 验，往往起到画龙点睛的作用，使我收益匪浅。在生活上，导师和师母给 予了无微不至的关怀，使我克服了许多困难，增强了信心。论文的立项、 实旅、和撰写都凝聚着导师的一片心血。我的每一个进步都离不开导师的 关爱。在此。谨向楼老师和师母致以崇高的敬意和衷心的感谢。 在三年的学习生活中，得到栽桑组全体老师的热情指导和帮助，使我感 受到这个集体的温暖。在此谨向叶志毅博士、周金妹老师、林景仙老师、 张有做老师致以深深的谢意。同时感谢徐俊良教授、金伟教授、鲁兴萌博 士、顾国达博士、朱祥瑞博士、缪云根博士、蒋振东老师、林虹老师等蚕 学系各位老师在学业上给予的指导和谍助。感谢园艺系曹家树教授的指导 和提供的一切方便条件。感谢钟伯雄牌士在学业上的指导，感谢谈建中博 士在实验中的指导，感谢钟名其、壬洪利师兄的帮助。感谢浙江省农科院 蚕桑研究所的杨新华，吕志强提供接穗。感谢蚕桑队赵玉兴师傅的帮助。 感谢陕西省蚕桑丝绸研究所的钱永华博士、宋新华、苏超、苏利红等同事 的帮助。也感谢同乡和校友张敬泽老师、刘鹰、上官儒、王江峰等给予的 生活上的帮助。 特别感谢我的妻子李芳红女士和我的岳父母，是他们克服了许多困难， 帮我解除了后顾之忧。特别感谢我的兄长和姐姐，是他们替我承担了一切 责任，给予了巨大的帮助。特别感谢我的父母亲，谨以此文献给他们。 焦锋