梅花鹿β-防御-1(sibd-1)全长cdna克隆及序列分析.pdfVIP

摘 要 防御素(defensins)是一类广泛分布于动植物界的富含半胱氨酸的阳离子内源性 抗微生物肽，既是生物体内先天性免疫的重要组成成分，又是黏膜表面抗微生物屏障 的组成成分。据防御素的分子特征、基因结构及表达位置不同可分为Q一防御素、B一 防御素、0一防御素、昆虫防御素和植物防御素五种类型，其中13一防御素主要分布于 哺乳动物及禽类的黏膜上皮细胞内。梅花鹿是我国一级保护动物，其全身都可入药， 具有丰富的药用价值和经济价值。舌是梅花鹿与外界的直接接触器官，舌黏膜不仅是 一层物理屏障还是化学屏障。 本研究从梅花鹿舌黏膜上皮组织中提取总RNA，通过反刍动物B一防御素的cDNA 保守序列设计一对引物，采用RT—PCR(ReverseTranscriptionPCR)技术扩增出梅 花鹿B一防御素(sika 体中，进行双酶切鉴定，将酶切鉴定正确的质粒进行测序。测序结果证实所克隆的cDNA Reading 防御素的特征性结构，即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基(C)。接着又采用eDNA ificationofcDNA 末端快速扩增(RapidAmpl 7 译区(5 基酸中，包括由20个氨基酸残基组成的信号肽、6个氨基酸残基组成的前片段和38 个氨基酸残基组成的成熟肽。在预测的38个氨基酸残基的成熟肽中有9个带正电荷的 氨基酸残基(5个精氨酸R，3个赖氨酸K，1个组氨酸H)，没有带负电荷的氨基酸， 因此siBD-1是一个阳离子肽。 经DNAStar软件对siBD一1的核苷酸序列及氨基酸序列进行同源性分析，结果表明： siBD一1与牛的B一防御素同源性最高，与驯鹿、山羊、绵羊和骆驼的B一防御素的同源 性次之，与人和猪的B一防御素的同源性最低。 7 7 关键词：梅花鹿；13一防御素：克隆；RT-PCR；3RACE：5RACE andS of in Analysis Cloningequence Sika Abstract kindofcationicantimicrobial isan Defensinsisone pcptides，whichimportant ininnate andmucousmembranesurfaceantimicrobialscreen． component immunity Defensinsdistribute intheanimaland tothedifferencesof widespread plant．According of aredevidedinto molecule Stmcture，the character，geneticpositionexpression,defensins five defensinand defensin． plant in and is inthemucousmembranecellsmammals 13-defensinsmainlyexpressed epithelial ayes．Sikaisthefirstclass animalinour overthe