嗜热真菌themomyces lanuginosus耐热木聚糖酶性质及应用研究.pdf

摘要 B-1，4-内切木聚糖酶(EC 3．2．1‘8)以内切方式作用于木聚糖主链，产生不同链长的寡糖及少 量的木糖，是木聚糖降解酶系中最关键的酶。微生物木聚糖酶在食品、饲料及制浆造纸等行业中 广泛的应用前景吸引了众多研究者的目光。本文针对嗜热真菌z CBS 288．54系统且 lanuginosus 深入地进行了菌种改蓖、发酵产酶条件、木聚糖酶性质及应用等的研究，主要内容和结论如下： 1．采用紫外线照射和化学诱变剂处理菌株z CBS288．54，并通过摇瓶发酵筛选变异 lanuginosus 株。得到了木聚糖酶高产菌株z CES288．54-M18；对影响该株菌液体发酵产酶的碳氮 lanuginosus 源、初始pH值、接种量以及温度等因素进行了详细的探讨。结果表明．相对于其它来源木聚糖， 玉米芯水不溶木聚糖为最佳碳源；酵母提取物和胰蛋白胨作为复合氮源时效果最好；培养基最适 u／mL。 初始pH值为7．0，最适培养温度为50℃。在最适条件下菌株发酵所产酶活力最高达1,834 2．研究了嗜热真菌z CBS288．54．M18固体发酵生产木聚糖酶的碳氮源组成，料水比， lanuginosus 培养基初始DH值，发酵温度及接种量等的影响。结果表明，以麦麸和玉米芯粉(8：2)作为复 合碳源，酵母提取物和胰蛋白胨(1：1)作为复合氮源时，菌株所产的木聚糖酶量相比未优化碳 7．0为最适。菌 氮源的培养基提高幅度高达200％。其最佳产酶的料水比为1：3，培养基初始0rI 株在50。C条件下发酵5天，能够得到活力高达15023U／g干基碳源的木聚糖酶制剂，且该酶制剂 不含纤维素酶和蛋白酶活性。 3．通过采取盐析、凝胶过滤及离子交换层析，得到了经SDS．PAGE确认的电泳纯的木聚糖酶。 kDa。 整个纯化过程其酶活回收率为21．5％，纯化倍数为33．6倍，酶分子量约为26．2 6．5．10．0范围内相当稳定。该酶的最适反应温度为70．75℃， 4．酶最适反应pH值为7．50，在pH 且具有优良的耐热性能：在60℃保温5h后残余酶活力在85％以上。该酶的底物特异性范围较窄， 仅对木聚糖表现出活性。采用Sigma的四种天然底物桦术木聚糖，榉木木聚糖，燕麦水不溶性木 聚糖及燕麦水溶性木聚糖探讨了该酶的动力学特性，Jo值分别为4．0、4。7、23．4和2．0。基于该 酶的分子量、水解特性及氨基酸组成分析可知该酶属于典型的(3／11族木聚糖酶。 5．色氨酸残基和谷氨酸(或天冬氨酸)残基是维持酶活性的重要基团。木聚糖对NBS的修饰有 保护作用：3,0 mgtmL的桦木木聚糖底物可完全阻止NBS对耐热木聚糖酶的修饰作用。木聚糖底 物不能阻止WRK对耐热木聚糖酶的失活作用。色氨酸和谷氨酸(或天冬氨酸)残基位于酶活性 中心；色氨酸残基位于酶的底物结合中心，而谷氨酸(或天冬氨酸)残基可能位于酶的催化中心。 6．研究了纯化的耐热术聚糖酶对面包品质及老化的影响，探讨了耐热未聚糖酶影响面包发酵及烘 烤过程的作用机理。结果表明，适量添加木聚糖酶的面包体积显著增加且面包芯的组织结构优良， 同时老化变缓；面团中添加1．Smg／kg木聚糖酶时，面包体积增加43％，硬度减小44％，其老化 速率常数k值相比对照组下降幅度高达48％。 7．探讨了应用耐熟木聚糖酶进行非木材纤维浆(麦草浆)及木浆(针叶木硫酸盐浆)生物助漂的 特点。当用酶量为20U／g绝干浆时，麦草浆的自度与对照浆