山定子遗传转化系的建立.pdfVIP

中文摘要 本实验以山定子叶片为实验材料，采用农杆菌介导法，研究了抗生素及转化过程中各因素对 转化的影响，成功获得转化．MMrtl基因的山定子转基因植株。建立了山定子转化体系，为山定子 性状的定向改良奠定基础．具体实验结果如下； 组织和不定芽诱导的影响．结果表明，羧苄青霉素对山定子叶片再生有明显的抑制作用，浓度低 于450m班的头孢霉素对山定子叶片愈伤和不定芽诱导影响不大．极低浓度的潮霉素即可导致山 定子叶片大面积褐化死亡，不适合做筛选抗性芽的抗生素．Kan浓度为40mg／L时，恰好可完全 抑制不定芽再生而不使叶片死亡，可作为山定子叶片转化过程中合适的筛选压力浓度． 通过比较在卡那霉素筛选培养基上的抗性芽百分率，研究激素配比、乙酰丁香酮、脯氨酸、 共培养时间、预培养时间、侵染时间、暗培养时间、培养基碳源及固化物对转化的影响．结果表 明：预培养不利于山定子叶片的转化；菌液中添加乙酰丁香酮和脯氨酸对转化无明显影响；侵染 10或15min，共培养3天，暗培养2或3周得到的抗性芽百分率最高；转化后叶片再生培养基的 mg／L+TDZ4mg／L．抗性植株经PCR检测，初步证明外源目的基因已整合到山定子基因组中． 关键词：山定子；叶片l遗传转化；影响因素 Abstract theleavesasthe antibiotics and∞vI：nl白_c|【o碍which Using material，different a丘ed一驴口64d甜血肼 mediatedtransformationofMalusbaceata Iiunefac／ens gem Borkh懈invcstigateat．The transgcnic shoot baccataBorkhwith ofMalus the ofMx／rtlindicatedthat nansl60日nano咀 targetgent genetic ofMalusbaccataBortdahadbeenestablished．Allof血is afotmditionof the system layed upgrating charactersofMalusbaccataBork．Theresultsis118below： Effectsof callus and on inductionandshoot hygromyein carbenieillin,eefotamxim,kanamyein fiomtheleavesofMalusbaccataBorkh results that showed regeneration w∞investigated．The restrainedthe 洲eillin leaves ofMalusbaccataBorlrJa had regeneration effeclsthecallusinduelion 0n aridshoot whenthcconcentrat