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小麦新材料 RSP的人工合成及其穗发芽抗性研究 博士生：兰秀锦 导 师：郑有良教授 摘要 tauschii 节节麦UegilopsCosson)是六倍体普通小麦的祖先种之一，D染 色体组的供体种，广泛分布于小亚细亚、里海、土耳其、伊朗、伊拉克、土库 曼斯坦、阿富汗、塔吉克斯坦、阿塞拜疆、巴基斯坦和中国等地。通过形态学， 同工酶和种子贮藏蛋白变异，以及RFLP分析等一系列研究发现，节节麦遗传变 异类型远比普通小麦D染色体组变异丰富；并推测在由四倍体小麦与节节麦天 然杂交、自然加倍进化成六倍体普通小麦的过程中，参与普通小麦起源的节节 麦的遗传变异相当有限。节节麦在生物和非生物抗性方面具有广泛的遗传多样 性．如：抗条锈、叶锈、秆锈、白粉、眼斑等病害和抗黑森瘿蚊、抗蚜虫、螨 虫、根结线虫以及抗冻、耐盐、抗干热胁迫和抗穗发芽等。 本研究对利用长休眠节节麦与四倍体小麦杂交，通过染色体工程技术，人 工合成了双二倍体(RSP)，并对该双二倍体(RSP)进行细胞学、形态学、穗 发芽抗性的遗传与分子标记，以及低分子谷蛋白亚基基因的分子克隆进行了研 究。 以四倍体小麦地方品种矮兰麦(Triticum turgidumL。，2n=28，AABB)为母 tauschii 本与长休眠的节节麦(Aegilops 名为RSP。根尖细胞学观察为42条染色体，花粉母细胞减数分裂中期I染色体 微核，说明细胞减数分裂不完全正常。形态特征和主要农艺性状上一些偏向于 母本，一些倾向于双亲的中间类型，一些性状倾向于父本，但还有～些性状， 如株高、穗长、小穗长、颖长、种子长、千粒重等均明显超过双亲。酯酶同工 酶分析表明，该双二倍体保留了双亲的部分谱带，为双亲的互补类型，但双亲 均有部分谱带丢失。 对RSP五个时期的各种发芽率及相对抑制率分析表明，胚的发芽率随灌 浆时期的增加而增加，整穗发芽率、种子发芽率及种子加颖壳发芽率均在开 花后35天最高。从平均值看，胚发芽率，种子发芽率种子加颖壳发芽率整 穗发芽率，分别为53．22％、7．83％、4．83％和2．86％。从抑制率看，种子抑制 率各时期平均高达85．29％，而整穗抑制率为63．47％，表明其穗发芽抗性主要 来源于种子的休眠性。就其各时期的最高值看，整穗发芽率也仅有6．1％，而被 四川育种界视为抗穗发芽的小麦品种“Jll育12”，在同年的穗发芽室内测试中， 其穗发芽率为27．6％，表明节节麦的抗穗发芽特性在普通小麦遗传背景下得到 了表达，其抗性远强于现有的推广品种。遗传分析表明，RSP的穗发芽抗性受 隐性单基因控制。单体分析揭示其抗性主效基因位于2D染色体上。 在已知RSP的隐性主效穗发芽抗性基因位于2D染色体的基础上，对 对SSR引物中，共有9对引物在亲本间扩增出有多态性的微卫星标记，多态性 指数为60％。F2单株DNA的PCR扩增表明，9对引物均表现出与抗穗发芽呈 正相关关系，其中，Xgwm261与抗穗发芽基因的连锁最为紧密，遗传距离为 31．17cM。 采用PCR法，从合成小麦RSP中克隆得到3个不同的低分子量谷蛋白亚 中，LMWRSP-l(Gerd3ank登录号：AY67668 AY676683)的编码区长废分别为825 bp和915bp，可分别编码274和304个氨 码子·而是1个不编码成熟蛋白的假基因。与已知LMW-GS基因进行比较发现， H 的基因相似性最高。 利用农艺性状优良、优质的红粒小麦品种绵阳11以及2个白粒、极易穗 个组合的F2单株和F3株系的穗发芽测试，从RSP×绵阳11中筛选出21个与 和RSP×88-1643组合中共筛选出5份穗发芽在7％以下的白粒株系。这些株系 或单株相对于RSP的高秆、晚熟等不利性状已有较大改良，为节节麦抗穗发芽 基因向优质或白粒小麦中转移创制出了更容易利用的育种中间材料。 关键词：小麦；节节麦；取二倍体；穗发芽抗性；细胞遗传：分子标记：基因克隆