多重PCR检测四种食源性病原弧菌.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(8):1682-1686 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.08.018 多重PCR 检测四种食源性病原弧菌 1 1 2 1,3 魏 霜 ，冼钰茵 ，赵 晖 ，吴希阳 1 2 3 （暨南大学理工学院食品科学与工程系，广州 510632 ； 湖北省出入境检验检疫局检验检疫技术中心，武汉 430022 ； 广东省食品安全卫生应急 技术研究中心，广州 510632 ） 摘要：【目的】建立在扩增内标存在下同时快速检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌4 种食源 性致病菌的五重PCR 方法。【方法】以细菌16S rRNA 基因为扩增内标靶序列，针对溶藻弧菌gyrB 基因、副溶血弧 菌collagenase 基因、创伤弧菌vvhA 基因、霍乱弧菌ompW 基因，分别设计特异性引物，建立多重PCR 体系，对 其灵敏度和特异性进行评价，并将建立的五重PCR 应用于弧菌的筛选。【结果】建立的多重PCR 检测体系对混合模 5 板中副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌的灵敏度达 10 CFU/mL，霍乱弧菌的灵敏度达 10 CFU/mL，经特异性评价 证实其特异性好，并能有效指示PCR 反应的假阴性，将建立的多重PCR 应用于69 株疑似弧菌菌株的鉴定，其结果 与生理生化鉴定结果一致。【结论】该方法能够快速、灵敏、准确地检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌和霍乱 弧菌4 种食源性致病菌，灵敏度高，并能有效指示PCR 反应的假阴性，适用于食品中常见致病性弧菌的快速筛检。 关键词：弧菌；检测；多重PCR Simultaneous Detection of Vibrio alginolyticus, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus and Vibrio cholerae Using Multiplex PCR 1 1 2 1,3 WEI Shuang , XIAN Yu-yin , ZHAO Hui , WU Xi-yang 1 2 ( Department of Food Science and Engineering, Ji ’nan University, Guangzhou 510632; Hubei Entry-Exit Inspection and 3 Quarantine Bureau Inspection and Quarantine Technology Center, Wuhan 430022; Food Safety and Health Emergency Technical