鹅beta;-防御素10基因的分离、鉴定与表达.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(5):999-1009 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.05.022 鹅β-防御素10 基因的分离、鉴定与表达 1,2 1,2 2 2 2 1 周财源 , 张名岳 , 韩宗玺 , 邵昱昊 , 刘胜旺 , 马得莹 1 2 （东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨 150030； 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室， 哈尔滨 150001） 摘要：【目的】从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10 （avian β-defensin 10，AvBD10）基因，通过大肠杆菌进 行原核表达，检测重组鹅AvBD10 蛋白的生物学特性。【方法】采用RT-PCR 方法，从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10 基因。根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建系统进化树，进行遗传进化分析； 并应用荧光定量的方法对该基因的组织表达水平进行鉴定。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1 上进行原核 表达，并对该重组蛋白进行纯化，测定体外生物学活性。【结果】从鹅肾脏组织中克隆出了鹅AvBD10 基因，该基 因的cDNA 大小为207 bp,编码68 个氨基酸。经遗传进化分析表明，该基因推导的氨基酸序列与鸭AvBD10 的同源 性最高，达92.7%。通过对重组蛋白抗菌活性的检测发现，该蛋白对12 种致病性细菌均具有较强抑菌作用，但在 高盐离子浓度下活性减弱。并且重组蛋白不具有溶血的特性。【结论】成功克隆并表达了鹅AvBD10 基因，原核表 达产物具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。 关键词：鹅AvBD10; 克隆; 遗传进化分析; 组织表达; 抗菌活性 Isolation, Characterization, and Expression of Goose Avian β-Defensin 10 1,2 1,2 2 2 2 1 ZHOU Cai-yuan , ZHANG Ming-yue , HAN Zong-xi , SHAO Yu-hao , LIU Sheng-wang , MA De-ying 1 2 ( Institute of Animal Nutrition, Northeast Agricultural University, Harbin 150030 ; Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Division of Avian Infectious Disease, National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin 150001) Abstract: 【Objective 】The objective of this study was to clone avian β-defensin 10 (A