福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板消减cDNA文库的构建.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(4):829-834 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.04.022 福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板 消减cDNA文库的构建 1 1, 2, 3 2 2 1 1 2 4 3 2 宁官保 ，田文霞 ，王 瑞 ，覃 平 ，乔建钢 ，李宏全 ，李家奎 ，毕丁仁 ，潘思轶 ，郭定宗 1 2 3 （山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801 ； 华中农业大学动物医学院，武汉430070 ； 华中农业大学食品科技学院，武汉430070 ； 4 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室，武汉430070 ） 摘要：【目的】为应用cDNA芯片技术筛选肉鸡胫骨软骨发育不良（TD）时序性差异表达基因，本研究构建了 早期生长板消减 cDNA 文库。【方法】将 7 日龄 AV 肉鸡随机分为两组，对照组（control，C）饲以基础日粮，试 验组（thiram diet-fed，T）饲以基础日粮添加福美双 100 mg·kg-1 ，2 d 后继续饲以基础日粮，诱发肉鸡 TD。应 用抑制消减杂交技术（SSH）构建正反向消减 cDNA 文库，用 PCR 验证两个文库中克隆的插入片段，随机抽取 100 个阳性克隆测序，对所测序列同源性分析和功能预测。【结果】从两个文库共获得2 227个有效阳性克隆，插入片 段大小主要分布在200—1 000bp之间；所测序列中有97条 ESTs与GenBank中的鸡基因序列同源性达到99%，且 非冗余度达到68.7%；此外，有3条ESTs未找到同源序列。这些基因具有构成细胞外基质，参与软骨内骨化和骨 的重构，调节骨发育，行使信号转导、血管发生，参与电子传递及能量代谢等功能。【结论】成功构建了消减 cDNA 文库，将为进一步点制cDNA 芯片，筛选不同阶段的差异表达基因奠定了基础，也为肉鸡TD机理研究提供新线索。 关键词：消减cDNA文库；胫骨软骨发育不良；福美双；抑制消减杂交（SSH）；差异表达基因 Construction of Subtracted cDNA Library of the Early Growth Plate in Broiler Chickens with Thiram-induced Tibial Dyschondroplasia 1 1, 2, 3 2 2 1 1 NING Guan-bao , TIAN Wen-xia , WANG Rui , QIN Ping , QIAO Jian-gang , LI Hong-quan , 2 4 3 2 LI Jia-kui , BI Ding-ren , PAN Si-yi , GUO Ding-zong 1 2 ( College of