苹果MdcyMDH过量表达对光合、激素和生长的影响.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(14):2868-2875 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.14.018 苹果 MdcyMDH 过量表达对光合、激素和生长的影响 王庆杰，金仲鑫，周李杰，郝玉金，姚玉新 (山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018) 摘要：【目的】获得过量表达苹果细胞质苹果酸脱氢酶基因（ MdcyMDH ）的苹果植株，评价其过量表达对转基 因株系生长的影响，并通过光合特性和和激素水平来探讨其调控生长的机理，为进一步揭示该基因调控生长发育 的机制奠定基础。【方法】从苹果叶片中克隆 MdcyMDH 编码区，连接植物表达载体pBI121，转化农杆菌LBA4404； 利用农杆菌侵染‘嘎啦’苹果叶片，通过叶片再生的方法获得 MdcyMDH 过表达的转基因苹果株系。以分化的苹果 组培苗叶片为材料，提取基因组 DNA，利用来自 35S 启动子和转化基因序列的引物，通过 PCR 初步筛选转基因株 系；然后，提取初筛的转基因苹果组培苗叶片RNA，分别采用半定量和荧光定量PCR 的方法检测MdcyMDH 表达量， 来确定 MdcyMDH 过表达株系。以继代培养 40 和 60 d 的野生型和转基因苹果组培苗为材料，进行生根处理，30 d 后测定 MdcyMDH 过表达对组培苗表型以及株高、叶片数量、根重等生长参数的影响。以驯化的、在大田生长一年 的野生型和转基因苹果苗为材料，测定叶片光合参数和叶绿素含量的变化；以组培苗为材料，利用液质联用仪测 定叶片内源激素含量的变化。【结果】以苹果叶片基因组DNA为材料，PCR 初步筛选获得了3个转基因株系，即Line 2、Line 3 和 Line 4；半定量和荧光定量 PCR 检测发现 Line 2 和 Line 4 中MdcyMDH 表达量分别比野生型提高了 12 倍和 5 倍，因此确定以上两个株系为MdcyMDH 过表达株系。此外，MdcyMDH 过量表达也提高了叶绿体苹果酸脱 氢酶基因（MdchMDH ）表达量。组培苗生根培养30 d后，MdcyMDH 过表达对转基因株系的株高、叶数目、茎粗度、 地上部重量未造成显著性影响，但小幅提高了转基因株系的株高和地上部总重量；与野生型相比，MdcyMDH 过量 表达显著提高了根系的重量和总鲜重。MdcyMDH 过表达显著提高了转基因株系的光合速率，Line 2 和 4 光合速率 分别提高了 13.2%和 15.1%；转基因株系的蒸腾速率和气孔导度总体上都有显著性提高，但其胞间 CO2 浓度显著降 低；MdcyMDH 过量表达显著提高了叶绿素 a、叶绿素 b 和叶绿素总含量，与对照相比，Line 2 和 4 株系叶绿素总 含量分别提高了20.4%和15.9%。叶片激素含量测定表明，MdcyMDH 过量表达显著抑制了ABA水平，其含量约为对 照的 1/2。【结论】 MdcyMDH 过量表达通过提高光合能力和降低 ABA 水平促进了转基因苹果组培苗的生长，尤其是 促进了生根。 关键词：苹果；MdcyMDH；转基因；生长势；光合特性；脱落酸 Impacts of MdcyMDH Overexpression on Photosynthesis, Hormone and Growth in Apple WANG Qing-jie, JIN Zhong-xin, ZHOU Li-jie, HAO Yu-jin, YAO Yu-xin (College of Horticultural Science and Engineering, Shandong Agricultural University/State Key Laboratory of Crop Biolo