小麦盐胁迫响应基因TaSRP的克隆及功能鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(12):2292-2299 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.12.002 小麦盐胁迫响应基因TaSRP 的克隆及功能鉴定 1,2 2 2 2 2 2 1 胡 笛 ，徐兆师 ，崔晓玉 ，陈 明 ，李连城 ，马有志 ，张小红 1 2 （西北农林科技大学农学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西杨凌 712100； 中国农业科学院作物科学研究所/ 国家农作物基因资源 与基因改良重大科学工程/农业部麦类生物学与遗传育种重点实验室，北京 100081） 摘要：【目的】土壤盐碱化是制约中国小麦生产的重要因素之一，耐盐性改良成为重要的育种目标。分析小 麦TaSRP 的功能，解析TaSRP 的耐盐性作用机制。【方法】对小麦盐处理转录组测序结果进行分析，发现一个受盐 胁迫诱导表达的小麦凝集素类基因TaSRP。根据TaSRP 编码的氨基酸序列，通过在NCBI 中比对得到水稻、大豆和 拟南芥中与TaSRP 相似的蛋白序列，利用 DNAMAN 和MEGA5.05 软件进行多重序列比对和同源性分析。根据 TaSRP 的保守序列设计特异引物，利用TaSRP 的实时荧光定量PCR 检测TaSRP 在不同胁迫处理条件下的表达模式；构建 带有CaMV 35S 启动子的16318hGFP-TaSRP 绿色荧光表达载体，利用瞬时转染法将重组质粒和对照空载体导入拟南 芥原生质体，室温黑暗培养16 h，激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光信号；扩增TaSRP 启动子序列，利用植物顺 式作用元件数据库PLACE （http: //www.dna.affrc.go.jp/PLACE ）分析启动子区域中参与非生物胁迫响应的顺式 作用元件；将TaSRP 的cDNA 序列连入带有CaMV 35S 启动子的pBI121 表达载体中构建pBI121-TaSRP 表达载体， 转入C5C81 农杆菌中，采用蘸花法侵染拟南芥得到转基因株系，并进行耐盐性鉴定。【结果】TaSRP 具有EUL 保守 区，属于卫矛凝集素（EUL ）家族，定位在细胞质内。氨基酸序列同源性及系统发育树分析发现，TaSRP 与水稻的 OSR40 类蛋白 （OSR40g3、OSR40g2 和OSR40c1 ）的同源性最高；与拟南芥、大豆的同源性较低。TaSRP 启动子含有 一系列对盐、ABA 和低温等非生物胁迫响应的调控元件。实时荧光定量PCR 分析显示，TaSRP 受ABA 和盐胁迫上调 表达，对干旱胁迫无明显响应。抗性试验结果显示，在不加NaCl 的条件下，野生型与过表达株系总根长基本一致， -1 -1 在125 mmol·L NaCl 和 150 mmol·L NaCl 处理的培养基上，3 个转基因拟南芥株系的总根长均大于野生型拟南芥 的总根长，并达到显著性差异，表明过表达株系有较好的耐盐性，TaSRP 在拟南芥中过表达能够提高拟南芥对盐 胁迫的抗性。【结论】TaSRP 提高了转基因拟南芥对高盐的抗性。 关键词：小麦（Triticum aestivum L. ）；卫矛凝集素家族；胁迫响应；实时荧光定量PCR；耐盐性 Isolation and Functional Analysis of Salt-Responsive Gene TaSRP in Wheat 1,2 2 2 2 2 2