雄烯二酮高产菌的诱变育种及发酵性能研究.pdfVIP

雄烯二酮高产菌株的诱变育种及发酵性能研究 摘 要 。雄烯二酮(AD)是制备甾体激素类药物的重要中间体，可通过微生物选择性 切除植物甾醇侧链制得。微生物法制取AD具有产品纯度高、生产成本低、周期 短等特点，但也存在菌种转化能力普遍不高，底物甾醇在水中溶解度低等缺点。 针对上述问题，本文通过诱变育种筛选出一株AD高产突变株分枝杆菌 Mycobacteriumsp．BD696．6，显著提高了AD产量和转化率，并且以有机相一水 相两液相培养系统作为发酵系统，明显提高了甾体底物的投料量。同时，研究 了培养基组成以及发酵条件对转化的影响。 研究的主要结论有； (1)采用紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变以及两者复合诱变方法对分枝杆菌 Mycobacteriumsp．BD696进行诱变，筛选得到一株AD高产突变株分枝杆菌 Mycobacterium AD转化率为61．4％，比出发菌株提高13．5％。连续传代5次，生产稳定性良好。 (2)通过单因素实验和正交实验，确定两相系统中有机相葵花油最佳添加浓 度为20％，水相培养基最佳C、N、P源以及金属离子种类和浓度分别为：糖蜜 0．05 0．3 6％，NH4N03 O．08％，FeS04·7H20 0．3％，(NH4)2HP04 g／L，ZnS04‘7H20 0．2∥L。在最佳培养基条件下以及甾醇添加量为6％o时，AD g／L，MgS04-7H20 转化率达到84．O％，比原培养基条件下的转化率提高了22．4％。 (3)通过单因素实验，确定了摇瓶发酵阶段的最适发酵条件是：液体种子培 30～32℃，初始pH7．5。 (4)在5L发酵罐中进行的放大培养试验验证了摇瓶发酵的高转化率。AD的 转化率随着甾醇添加量的提高而有所降低，但总产量明显提高。甾醇添加量在 甾醇的加量从经济角度考虑是可取的。 关键诃：雄烯二酮；植物甾醇：高产菌株；诱变育种；两相系统；发酵性能 Researchof Mutation andFermentation Breeding Strain Androst-4-ene-3，17一dione Producing ABSTRACT a middle ofsterolhormones Androst-4一ene-3，17-dionc(AD)waskey product andcouldbeobtained theside-chainof byselectivelycleaving phytoster01．The microbial ofADhadthe of costandshort production advantagehighpurity，low itwasrestrictedtheconversionofmicrobesandlOW time，but cycle by ability of this mutantwith solubilityphytoster01．Inexperiment，a highproductivity， was whichAD and