雨生红球藻的高培养及其虾青素的提取与纯化.pdfVIP

II 万方数据 III 万方数据 雨生红球藻的高效培养及其虾青素的提取与纯化 摘 要 虾青素超强的抗氧化性赋予了其突出的生理功能，如提高动物免疫力，清 除自由基、活性氧，抑制肿瘤等，因此，天然的虾青素具有广泛的应用价值和 前景。而雨生红球藻是目前公认的生产虾青素的最好生物来源。所以，关于提 高雨生红球藻的生物量以及细胞内虾青素的积累量、从雨生红球藻中高效地提 取虾青素以及虾青素的分离纯化等方面的研究具有重要的意义。 (1) 为探究光谱对雨生红球藻细胞生长及转化产虾青素的影响，测定了两 种阶段（细胞生长阶段，转化产虾青素阶段）藻细胞的吸收光谱以及不同光源 的发射光谱，并采用不同光源、不同光照强度照射培养藻细胞。结果表明：雨 生红球藻对其吸收峰处的光谱有较好的捕获利用能力，即红光可以促进绿色藻 细胞的生长，蓝光有利于红色藻细胞转化产虾青素。而且混合光源的光照更有 利于雨生红球藻的生长及转化：在总光强为 2500 lx ，红光与白光的强度比例为 2:1 时，雨生红球藻干重可以达到 0.98 g/L，比单独使用白光和红光照射下分别 提高了 36.11%和 15.91%；在雨生红球藻转化产虾青素阶段，发现在总光强为 7000 lx ，蓝光与白光的强度比例为 3:1 时，雨生红球藻中虾青素的积累量为 39.79 mg/L ，明显高于单独使用白光与蓝光转化下的产量。 （2 ）对发酵罐中雨生红球藻的流加培养进行了初步的探讨，结果表明，流 加操作可以促进雨生红球藻生物量的积累，而且当葡萄糖的浓度提高为原始培 养基中的 10 倍，其它物质的浓度提高为原始培养基的 5 倍时，在生长的第 4 d, 5 d, 6 d 分别流加 50 mL 上述浓缩物，8 d 后藻的干重为 0.92 g/L，比对照组提高 了 26.03% 。但在培养后期，由于发酵罐本身的局限性，雨生红球藻的生长受到 抑制，在今后的研究中，为得到更高浓度的藻液，可以与其它光照效率高的反 IV 万方数据 应器相连。 (3) 探究了雨生红球藻中虾青素的最佳提取溶剂，结果表明，二甲基亚砜/ 丙酮（4/1, v/v ）的混合溶剂最适宜虾青素的提取，其提取量为 34.73 mg/L ，比 乙酸乙酯/ 乙醇（2/ 1, v/v）的混合溶剂提取下提高了 14.12%。并在单因素的基 础上，采用 Box-Behnken 对虾青素的提取条件进行优化，得到最优提取条件 为：提取温度，51.72℃；提取时间为 42.32 min ；料液比为 1:6.33 ；虾青素的提 取量达 35.49 mg/L 。 (4) 通过薄层层析法和高效液相法检测从雨生红球藻中提取得到的总类胡萝 卜素，结果表明，总类胡萝卜素中主要含有虾青素单酯、虾青素双酯，游离虾 青素的含量较少，还有少量其它成分。并研究了正己烷与丙酮不同配比对虾青 素 TLC 展开效果的影响，结果表明，两者之间的最优配比（体积比）为 7:3， 在此展开剂的作用下，游离虾青素的 Rf 值为 0.21，而且，各种组分都能较好地 分开。 (5) 对虾青素酯的皂化工艺进行了研究，以游离虾青素的产量为评价指标， 对影响虾青素酯皂化的碱浓度、温度和时间进行了探讨，并在单因素实验的基 础上，利用 Box-Behnken 对皂化的条件进行优化，结果表明，虾青素酯最优的 皂化条件为：碱浓度为 40