雷州黑鸭pax、dcn和mstn基因在胚胎期骨骼肌中差异性表达研究.pdfVIP

雷州黑鸭Pax3 、DCN 和MSTN 基因在胚胎期骨骼肌中 差异性表达研究 摘要 鸭肌纤维的生长发育情况与鸭肉品质性状密切相关，在肌纤维的形成以及生长发 育过程中，Pax3 、DCN 和MSTN 基因对骨骼肌的生理特性起到决定性作用。为进一 步了解Pax3 、DCN 和MSTN 基因与雷州黑鸭骨骼肌形成的密切关系，以及在骨骼肌 形成过程中相互之间的功能联系，为改善雷州黑鸭肉品质打下分子基础。本研究对雷 州黑鸭第8、13、18、23 、28 天胚胎的胸肌和腿肌进行组织切片观察，并采用QRT-PCR 与 western-blot 试验方法检测了 Pax3 、DCN 和 MSTN 基因在以上各阶段胸腿肌中 mRNA 与蛋白的发育性表达情况。同时用 QRT-PCR 法检测了雷州黑鸭 28 胚龄时 Pax3 、DCN 和MSTN 基因在心、肝、脾、肺、肌胃、小肠、脑、胸肌、腿肌中mRNA 的差异性表达量。本研究采用了RT-PCR 法对雷州黑鸭DCN 基因序列的CDS 区全长 进行了克隆，并构建了pcDNA3.1myc-His(-)A-DCN 真核表达载体。研究结果表明： （1）从不同胚胎期的胸肌、腿肌组织切片可见，胚胎发育过程中雷州黑鸭骨骼肌的 形成经历了成肌细胞，多核肌管，肌纤维形成的过程。雷州黑鸭胚胎期腿肌的发育明 显早于胸肌，且腿肌为早熟部位，胸肌为晚熟部位。 （2 ）本研究采用荧光定量PCR 的方法，对胚胎期雷州黑鸭Pax3 基因在骨骼肌中的 时空性差异性表达进行检测。结果表明，在不同胚胎期胸肌组织中，Pax3 基因mRNA 表达水平在23d 时达到高峰，在18d 时表达量最少；在腿肌组织中Pax3 基因mRNA 表达水平均在28d 时达到高峰，在18d 时表达量最少；在28 胚龄期的雷州黑鸭内脏 组织中，Pax3 基因在腿肌中的表达水平最高，在脾脏中第二，紧接着是胸肌。并采 用western-blot 的方法，对Pax3 基因在雷州黑鸭胚不同胚胎期的胸肌、腿肌组织中蛋 白表达水平进行检测，结果表明，在胸肌组织中，Pax3 蛋白在23 胚龄时表达量最高， 13 胚龄时最低；在腿肌组织中28 胚龄时表达量最高，8 胚龄时表达量最低。 （3 ）胚胎期雷州黑鸭DCN 基因在骨骼肌中的时空性差异性表达进行检测。结果表明， 在不同胚胎期胸肌组织中，DCN 基因mRNA 表达水平在28d 时达到高峰，在8d 时 表达量最少；在腿肌组织中DCN 基因mRNA 表达水平均在28d 时达到高峰，在8d 时表达量最少；在28 胚龄雷州黑鸭内脏组织中，DCN 基因在胸肌中的表达量第一， 第二是腿肌。并采用western-blot 的方法，对DCN 基因在雷州黑鸭胚不同胚胎期的胸 肌、腿肌组织中蛋白表达水平进行检测，结果表明，DCN 蛋白在胸肌组织中23 胚龄 表达量达最高，在 13 胚龄时最低；在腿肌组织中28 胚龄时表达量最高，8 胚龄时表 I 达量最低。 （4 ）本研究采用荧光定量PCR 的方法，对胚胎期雷州黑鸭MSTN 基因在骨骼肌中 的时空性差异性表达进行检测。结果表明，在不同胚胎期胸肌组织中，MSTN 基因 mRNA 表达水平在23d 时达到高峰，在8d 时表达量最少；在腿肌组织中MSTN 基因 mRNA 表达水平在28d 时最高，在13d 时表达量处于最低谷；在28 胚龄雷州黑鸭内 脏组织中，MSTN 基因在腿肌中的表达量最高，第二是胸肌。并采用western-blot 的 方法，对 MSTN 基因在雷州黑鸭胚不同胚胎期的胸肌、腿肌组织中蛋白表达水平进 行检测，结果表明，MSTN 蛋白在胸肌组织中23 胚龄时表达量达最高，8 胚龄时最 低；在腿肌组织中28 胚龄时表达量最高，8 胚龄时表达量最低。 （5 ）本研究成功的克隆雷州黑鸭DCN 基因CDS 区全长，并通过生物信息学分析发 现，雷州黑鸭的DCN 基因与鸡的遗传距离最近。对DCN 蛋白质结构进行预测时， 发现雷州黑鸭DCN 蛋白不存在跨膜结构，有1 处信号肽位点，该蛋白不是分泌型通 路信号肽，其氨基酸序列为亲水性，有13 个磷酸化位点和2 个N-糖基化位点。DCN 蛋白包含有3 个LRR8 、1 个富含亮氨