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多效唑对芋种质离体保存影响的初步研究 　　摘 要：以荔浦芋无菌试管苗为材料，研究了试管苗保存过程中不同浓度多效唑（PP333）对试管苗保存效果的影响。研究结果表明，多效唑对芋种质资源的离体保存有显著影响，在光照时间14～16 h/d，光照强度1 500 lx，室温（26±2）℃的培养条件下，在MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.02 mg/L+30 g/L蔗糖的培养基中添加0.6 mg/L PP333，试管苗可保存240 d，存活率为89.7%，且恢复生长后试管苗形态正常、长势良好，与对照株无明显差异。 　　关键词：芋；离体保存；生长恢复；多效唑 　　中图分类号：S632.1；S482.8+.92 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2013）24-0037-03 　　芋（Colocasia esculenta L. Schott），又名芋艿、芋头，其球茎富含淀粉、维生素和氨基酸等营养成分，是世界各地广为栽培的蔬菜和粮食作物[1]，也是可选的生物能源作物。广西是我国芋主产区之一， 拥有众多驰名中外的优良品种，如广西荔浦县的荔浦芋和梧州红芽芋是主要的出口芋产品。由于芋为无性繁殖作物，长期反复种植造成许多优良品种种性退化、品质变劣，种植面积日益减少，甚至濒临绝种；一些野生芋种质资源也因环境的改变和人为因素的破坏而逐渐消失。因此，作为广西特色农作物，芋的种质资源保存利用研究已迫在眉睫。对无性繁殖的蔬菜种质资源而言，因为不能以种子形式进行低温保存，所以离体保存技术是理想的保存途径之 　　一[2]。本文通过在基本培养基中添加不同浓度的多效唑（PP333），研究其对芋离体保存的影响，并对长期保存的材料进行生长恢复，为芋种质资源中长期保存体系的建立提供可选的技术方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 无菌材料的制备 　　以优良荔浦芋品种桂芋一号为试材，切取饱满的顶芽或侧芽，用自来水冲洗20 min，晾干，70%乙醇表面消毒30 s，浸入0.1%升汞溶液消毒10 min，无菌水冲洗4次，在超净工作台上剥取茎尖生长点接种于启动培养基MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.1 mg/L+30 g/L蔗糖中。1 周后，外植体开始膨大，随后长出叶片，待芽长到1.5～2.0 cm时，转接到增殖培养基MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.02 mg/L+30 g/L蔗糖中扩繁。 　　1.2 离体保存与生长恢复 　　选用生长势一致的试管幼苗，以MS+6-BA 　　2.5 mg/L+NAA 0.02 mg/L+30 g/L蔗糖为基本培养基，分别添加生长抑制剂多效唑（PP333）0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/L。培养条件：光照时间14～16 h/d，光照强度1 500 lx，室温（26±2）℃。每处理随机选取10瓶，每瓶3株，定期观察记载其生长情况和存活率。材料保存一定时间后取出，在室温和光照条件下恢复生长30 d后，转接到继代培养基和生根培养基上，调查保存材料的生物学性状。 　　2 结果与分析 　　2.1 多效唑（PP333）浓度对芋试管苗存活率的影响 　　将芋离体保存在添加不同浓度多效唑的MS培养基上，定期检查其存活率，并与对照（CK）作比较，从表1 可以看出，附加生长抑制剂PP333，可提高芋试管苗的存活率。短期内（60 d）各处理存活率均能达到100%。保存120 d后，PP333浓度在0.4～ 　　0.8 mg/L范围时，芋种质存活率提高，为82.0%～94.6%，均高于对照。保存180 d后，PP333各浓度处理都能提高芋种质的存活率，浓度在0.6～0.8 mg/L范围的存活率与保存120 d的效果相当，但PP333浓度为1.0～1.2 mg/L 时，存活率明显下降。保存240 d后，对照组植株枯萎死亡，仅存少量。PP333浓度为0.4 mg/L时，在180 d时的存活率（74.2%）明显高于PP333浓度为1.0～1.2 mg/L的存活率（49.0%～52.2%），但240 d后，其存活率迅速下降到23.6%，远低于浓度为1.0～1.2 mg/L的存活率（42.0%～51.4%）。结果显示，不同的保存时间，不同浓度的PP333处理离体芋种质的存活率不尽相同，其中MS培养基中含0.6 mg/L PP333的处理，芋离体种质的存活率最高，240 d后仍可达到89.7%。培养基中不添加PP333或浓度过低、过高都不利于芽的试管保存。 　　2.2 不同浓度多效唑（PP333）对试管苗长势的影响 　　从试管苗的株高变化来看（表2），随着PP333添加浓度的提高，芋离体植株株高逐渐降低，说明PP333能有效抑制植株的伸长生长。保存30 d时，PP333抑制株高的效果并不十分明显，