人精子顶体膜相蛋白32避孕疫苗的构建及免疫避孕效果的研究.pdf

签出占堂医堂睦2螋!生鲤±竺值逾奎 厶擅王耍佳题担去重自32壁垒瑾苴监控建丛鱼蕉堡垒煎墨酸班红 人精子顶体膜相关蛋白32避孕疫苗 的构建及免疫避孕效果的研究 研究生：石冰涛 导师：臧卫东教授 郑州大学基础医学院人体解剖教研室(郑州450052) 中国 郑州 摘要 目 的 免疫避孕与免疫不孕是生殖研究领域的两大重要课题，寻找合适的精子膜抗原是 解决这两个问题的关键所在。精予膜抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系，其中部 分抗原能引起机体产生相应的抗体，导致免疫性不孕。 Acrosomal 人精子项体膜相关蛋白32(Human Sperm DNA)长度1455bp，基因定位于 有睾丸特异性，分布于精子顶体赤道区及顶体内膜。hSAMP32在精卵结合以及精卵融 合过程中发挥重要作用，是导致免疫不孕众多因素之一。 基因疫苗是二十世纪九十年代发展起来的一种新型疫苗，它是指将编码特定抗 原的基因克隆到合适的质粒载体上，制备成核酸表达载体，通过肌肉注射、腹腔注射 等方法将其导入宿主机体，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白质，从而激发机体 产生特异性的免疫应答，所以又被称为核酸疫苗或基因疫苗。基因疫苗具有免疫持续 时间长、制备、携带方便、价廉等优点，它在免疫避孕方面的应用促进了避孕疫苗的 疫苗奠定基础。 塑世|厶堂医堂睦2嫂2生亟±堂丝逾g厶揎王耍签堰扭羞堑E!12堡翌蕉苴曲地丝丛丝堡避望煎墨啦盟红 方法 1． 逆转录聚合酶链反应(Reverse Chain Transcription-Polymerase 对引物，在引物的5’ 达载体。提取人睾丸组织总RNA，逆转录eDNA，PCR扩增目的基因片段。 2．hSAMP32基因测序：琼脂糖电泳，回收目的条带，同T载体连接。转化大肠杆菌TGI 菌株，氨苄青霉素(amp)和蓝白斑筛选。挑选白色菌落，进行菌落PCR鉴定和双酶切 鉴定，送TaKaRa公司测序。 四头肌部位，观察BALB／c小鼠生殖能力是否受到影响。 结果 GenBank(AF203447)报道的基因序列一致。 882bp对应处出现目的条带。 相比明显下降，同时用鼠抗hSAMP32血清做穿卵实验明显降低精子穿卵率。 蛋白分子量理论值一致。 结论 1．成功构建了pcDNA3．1(+)-hSAMP32重组质粒。 鼠骨骼肌中。 Ⅱ 塑趟厶堂医芏匠2螋2生熊±堂僮监塞 厶揎王亟i圭膳翅羞邕自墼竖芏毽蒸鲣控盛丛＆毽叠芏筮墨鳆型f扛 III 整捌点堂医堂医2鲤2笙鲤￡望世丝塞 厶揸王亟丝避翅羞缰E』丝蕉茔蕉苴监控盛丛鱼垂壁望筮墨鳆堡f筮 of Vaccine for Construction ImmunocontraceptiveCodingSperm Effectsof AcrosomalMembrane-AssociatedProtein32and of Study Immunocontraceptive Abstract Objective andimmune arctwo