全人源抗肝癌噬体单链抗体库的构建与筛选.pdf

全人源抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建与筛选 摘要 目的：构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库，从抗体库中筛选抗肝 癌的噬菌体单链抗体(ScFv)，并对其进行鉴定和测序分析。 筛选。筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序。 菌体抗体库，噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80％。用人肝癌 克隆，阳性率为33．6％。将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的 呈强阳性反应，而与正常肝细胞系QSG-7701、骨髓间质干细胞皿MSC、 原代培养的脐静脉内皮细胞HUVEC及其他人肿瘤细胞系反应呈弱阳 性或不反应。细胞免疫组化结果与细胞ELISA结果基本一致；免疫组 织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应，而不与正常肝组织 反应，反应部位主要见于胞膜、胞浆。对克隆A82进行测序分析，结 果表明：A82全长742bp，含1inker cDNA序列45bp，重链可变区基 因与人胚系IgVH3—23有94．3％的同源性，轻链可变区基因与人胚系 1inker-V4—2-J-L2。 结论：应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体 库技术，构建库容量达iX108的全人源抗肝癌单链抗体库。通过细胞 ELISA和免疫组化鉴定，获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异 性，为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。 关键词： EB病毒转化，噬菌体抗体库，肝癌，单链抗体 n of Constructionand human screening anti-hepatoma fusion Fv libraries phage single-chain ABSTRACT AIM： To and human constructscreen Fv fully anti—hepatomasingle-chain fusion libraries． phage ME’I’HoDS： bloodmononuclear withliver Peripheral cells(PBMCs)ofpatients cancerwere in sensitizedvitroandtransformed virus byEpstein-Barr andVL were PCRandcombinedto (EBv)．vHgenes reamplifiedby ofvariable were single-chainfragment region(ScFv)genes．ScFvgenes clonedintovectorfme5andtransformed intoMCl061 by to constructthe Wag ScFv-displayingpha