缺氧诱导因子-α和葡萄糖转运蛋白-1在不同月龄大鼠椎间盘纤维环中的表达及意义.pdf

·中文论著摘要· 缺氧诱导因子-1Q和葡萄糖转运蛋白一1在不同月龄大 鼠椎间盘纤维环中的表达及意义 刖 吾 椎问盘组织是人体内最大的无血管组织，由髓核和纤维环构成，二者长期处 于低氧环境。目前研究表明，随着年龄的增长椎间盘组织出现的基质成分的改变。 inducible 缺氧诱导因子一1(hypoxia inducible factor-1ct，HIF—la)可以通过对靶基因的转录激活，调控血管发生、红细 胞生成及糖酵解等过程。目前研究表明，HIF．1旺可能在椎问盘退变中发挥重要的 作用，但很少有关于HIF—lq和GLUT—l随着年龄变化在椎问盘纤维环组织的表达情 况的相关研究。本文观察不同月龄大鼠椎间盘纤维环中HIF—la和GLUT-1含量变 化，进一步探讨两者与椎间盘退变的关系。 实验材料和方法 一、主要试剂及仪器 试剂：兔抗鼠HIF—la多克隆抗体、兔抗鼠GLUT-1多克隆抗体、链酶亲和素． 过氧化物法(SABC)免疫组化即用型试剂盒及DAB(联苯二胺)显色液，兔抗 鼠D—actin单克隆抗体，(以上由武汉博士德生物化学试剂公司购买)，多聚赖氨酸 (Poly．L．Lysine，Sigma公司)，各浓度梯度酒精。 (Olympus，Japan)，电子天平，微量移液器，组织匀浆器，高压锅，高速离心机， 垂直板电泳转移装置，恒温水浴摇床，多用脱色摇床。 二、实验取材及实验分组 分组：健康Wistar雄性大鼠共50只(中国医科大学实验动物中心提供)，分为l， 取材：以质量浓度为259／L戊巴比妥那腹腔过量麻醉处死大鼠，取相同节段腰 一份标本室温下在体积分数0．1的甲醛溶液中固定4d，VonEbner法脱钙2周。常规 la 石蜡包埋后切成4 m厚的切片。将获得的另一份标本在显微镜下分离为髓核与纤 维环，迅速置于液氮中，转入。80℃冰箱中备用。 三、实验方法、检测指标及染色结果的判断标准 (一)实验方法、检测指标： l、免疫组织化学法(SABC法)检澳,s]HIF．1a、GLUT-1的表达情况。 (二)染色结果的判断标准 l、免疫组化采用DAB显色，HIF．1et的阳性表达为胞核和胞浆内棕黄色颗粒， 主要位于胞浆。GLUT-I的阳性表达为细胞膜出现棕黄色颗粒。图片应用 细胞率分析。 2、Westemblot法应用Quantityone分析系统将目的条带与D—actin的比值进行统 计学分析。 四、数据分析 采用spssl3．0统计软件进行分析，统计方法采用方差分析，各组间两两比较采 用LSD法，计算Pearson相关系数分析相关性。 实验结果 随着大鼠月龄的增长，其椎问盘纤维环组织中HIF．1s和GLUT．I的表达也发生 少，而老年组(18月龄)--者表达显著增加。且这种变化有显著统计学意义(P0．01) 结 论 1、HIF．1et，GLUT-I表达水平的变化与椎间盘退变的发生关系密切相关。 2 2、HIF．1a可以通过上调GLUT-1等相关因子并延缓椎间盘退变，可能作为椎 问盘退变治疗研究的切入点。 关键词 缺氧诱导因子一1Ⅱ；葡萄糖转运蛋白一1；椎l、日J盘退变； 3 英文论著摘要 ● The of Factor-laand Expression Hypoxia—·inducible Glucose intheAnulus Transporter-1 Fibrosusof DifferentRats Ages