几种植物中的过氧化物酶同工酶分析.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 2(3);7-10 1980 研 几种植物中的过氧化物酶同工酶分析’‘ 究 报 黄寿松2） 翁 坚 月匕 （中国科学院上海生物化学研究所） 口 过氧化物酶 (E.C.1.11.1.7)是一族 育种、物种分类、预测杂种优势、植物保护和植 能够利用H,02氧化供氢体的酶。它对H,O：的 物生理等诸方面的研究工作中被广泛采用。为 需求是非常专一的，而对供氢体的要求则较为 此，我们对植物的过氧化物酶同工酶的分离、分 广泛。酚类、胺类化合物、某些杂环化合物和 析技术作了一些研究，以期伐出适合于我国需 一些无机离子等都可以作为过氧化物酶的供氢 要的简便可行、迅速可靠的过氧化物酶同工酶 体。它们的催化反应式为： 狈i定分析法。 A巩＋H20,二A＋2H,O 材 料 和 方 法 式中AII,为供氢休，A为氧化型产物，E为过 （一）材料和样品的制备 氧化物酶。 过氧化物酶是由一个糖蛋白和一个氯正铁 水稻、高粱、小麦和长穗傻麦草等植物的种 子用10％的安替福民A（ntiformin）消毒、洗涤 血红素 IX(ProtoheminIX）的铁吓琳辅基缀合 后，置25℃恒温箱中温育发芽4-5天，取幼苗 而成。 在高等植物中，过氧化物酶广泛而大量地 3-5个置预冷小型玻璃匀浆器或研钵中，加人 存在着，并且有较多的同工酶，如无花果树汁和 0.1毫升水研磨匀浆，将样品移至小离心管中， 辣根等。研究表明，在植物不同的生长发育时 离心 3（500：．p.m.)15分钟，取上清液，混人等 期和不同的组织器官中，过氧化物酶同工酶的 体积50务的蔗糖溶液。电泳时，每根凝胶管加 0.05毫升的样品制备液。 数目和活性有很大的变化[2［-41。并且植物激素 （二）试剂和主要设备 也会影响它的酶谱，如~71嗓乙酸会抑制小麦和 豌豆植株过氧化物酶某些同工酶的表达，‘‘，而 试剂：丙烯酸胺 (acrylamide)、甲叉双丙烯酞 乙烯能引起i}fc豆和甘薯中过氧化物酶某些同工 胺(methylenebisacrylamide)、四甲基乙二 胺 (N,N,N,N-tetramethylethylene 酶的增加[71。此外，据报道，棉花等植物的抗病 性与过氧化物酶有关t}1［0 diamide，简称TE_MED)、三经甲氨基 甲烷 (Tris)、甘氨酸、过硫酸按、蔗糖、 过氧化物酶同工酶可采用电泳、层析等多 种分离方法，最常用而分离效果较好的是聚丙 嗅酚蓝 (Bromophenolblue)、联苯胺 (ben- 烯ft胺凝胶电泳法。 过氧化物酶同工酶的染 zidine),邻联 （二）茵香胺 o（-dianisidine)、 冰醋酸、无水醋酸钠、维生素C、过氧化 色方法也有多种。经典的有饱和联苯胺染色 氢，全部为分析纯 A（.R．级）或化学纯 法121oLiu进一步提出测定植物组织抽提液各 (C.P.级)o 个过氧化物酶同工酶相对活性的维生素C一联