pegfp-gakt体外转染mscs对下肢缺血大鼠血管生成的影响.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………．1 英文论著摘要……………………………………………．7 二、英文缩略语………………………………………………12 三、论文……………………………………………………13 论文一GFP／AKT重组质粒的构建及MSCs的分离、培养、鉴定 前言…………………………………………………．．13 实验材料与方法…………………………………………．．13 实验结果(附论文图片)……………………………………17 讨论……………………………………………………18 结论……………………………………………………20 论文二pEGFFP-C1／Akt体外转染MSCs后对VEGF表达的影响 前言………………………………．…………………．．23 实验材料与方法…………………………………………．23 实验结果(附论文图片)……………………………………26 讨论……………………………………………………29 结论……………………………………………………30 论文三pEGFP—C1／hkt体外转染骨髓间充质干细胞对下肢缺血大鼠血管 生成的影响 前言……………………………………………………31 实验材料与方法…………………………………………．．32 实验结果(附论文图片)……………………………………．35 讨论……………………………………………………40 结论……．……………………………………………．．40 四、本研究创新性的自我评价………………．…………………．．41 五、参考文献………………………………………………．．42 六、附录 综述……………………………………………………48 在学期间科研成绩……………………．…………………．．60 致谢…………．．：…………………．…………………．．61 个人简历………………………………………………．．62 ·中文论著摘要· 生成的影响 目 的 促进血管形成是当今国内外治疗缺血性疾病研究的热点之一，而血管内皮细 胞增殖、分化可导致毛细血管生成。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种能刺 激内皮细胞增殖，增加内皮通透性的血管源性蛋白。大量研究已证实VEGF是刺激 血管形成最关键的生长因子。 stem cells，MSCs)具有自我更新，克隆非 骨髓间充质干细胞(mesenchymal 造血组织的前体，并且具有分化骨细胞，软骨细胞，骨骼肌细胞，等多种细胞的 功能。而且在体内及体外被基因转染的MSCs可以保持稳定性。丝／苏氨酸激酶 kinase kinase (serine／threonineAkt)，又名为蛋白激酶B(proteinB，PKB) 是生物信号传递途径中的重要因子，并与磷脂酰肌醇一3一羟基激酶 在血管生成过程中伴有重要的作用。曾有研究证实MSCs中过量表达Akt可以抑制 细胞凋亡，促进细胞存活，而且少量的Akt就有作用。绿色荧光蛋白(green fluorescent Victoria)中分离 protein，GFP)从能发光的生物水母(Aequorea 出来现已被广泛应用于示踪活细胞内基因的表达，已经成为细胞与分子生物学研 究的一种流行的实验工具。 本试验：l、克隆构建GFP／Akt表达载体及鉴定，MSCs的分离培养及鉴定；2、 通过脂质体真核细胞转染法，荧光显微镜下观察GFP／Akt表达载体在鼠MSCs中的 肢缺血大鼠血管生成的影响。 方法 一、材料 医科大学动物试验中心)。 二、方法 1、克隆构建GFP／Akt表达载体及鉴定 GFP—Akt primer设计F 5 I位点)R7一TATC