流式细胞术检测小板微颗粒方法学探讨.pdf

流式细胞术检测血小板微颗粒方法学探讨 华中科技大学同济医学院 研究生：熊丽丽 导师：魏文宁吴健民 摘要 【目的】 应用流式细胞术(FCM)一富含血小板血浆(PRP)法检测血小板微颗粒 (PMPs)，并进行方法学、影响因素探讨及临床意义的评价。 标准微球进行定位对照和设置机器检测条件，调节机器阈值，设门计数PMPs占CD61 阳性颗粒的百分比。以ADP及胶原诱导血小板活化，计数活化以后血小板释放的 PMPs，作为阳性对照，评价该方法的可行性，同时探讨了不同抗凝剂抗凝PRP，不 同保存时间等对PMPs检测的影响。 【结果】 AAF 橼酸钠0．1lmol／L，茶碱15mmol／L，ERI 性疾病忠者检测结果提示血小板释放的PMPs的量均显著高于正常对照组(只O．01)。 【结论】 采用流式细胞术富含血小板血浆法检测PMPs方法可行，并且其操作简 单、影响因素相对较少，比较适合临床常规检测。同时PMPs的检测是检测血小板活 化的一个重要指标，而血小板活化对于早期诊断血栓性及出血性疾病具有重要意义。 关键词流式细胞术 血小板微颗粒血栓性疾病 Detectionofplatelet-derivedmicroparticles by flow cytometry Li—li Wei Wu Xiong Wen-ningJian—ming Abstract This istoestablish offlow objectivestudy optimization for evaluated． quantificationofplatelet—derived microparticles(PMPs)andsystemically Method rich as thenwerestained plateletplasma(PRP)wasprepared samples，and witha monoclonaldirectedtowards surface fluorochrome—conjugated antibody platelet latexbeadswasusedtocalibrateof glycoprotein．0．82I_tm forwardscatterthreshold and of offlow andasstandardfor parametersetupoptimizationprocedurecytometry PMPs．PMPs invitro ADPor weredetectedas counting generatedusing collagen positive control，and evaluatedthemethod． systemically 30 R