表达小鼠重组i-23基因的小鼠乳腺癌细胞系ma891il-23的建立.pdfVIP

中文摘要 表达小鼠重组lL-23基因的小鼠乳腺癌细胞系M 891／IL一23的建立 摘 要 目的：肿痛是严重影响人类健康的疾病，肿瘤的形成和 发展与宿主免疫监视功能的异常及肿瘤细胞免疫逃逸作用 密切相关。乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，在 发达国家及我国的一些大型工业化城市，乳腺癌的发病率已 居妇女恶性肿瘤的首位。目前，手术、化疗和放疗仍是乳腺 癌的主要治疗方法，但是都存在着一定的局限性。通过目前 常用方法治疗后，乳腺癌患者的五年生存率仍不理想；因此， 探讨新的治疗方法和措施刻不容缓。近年来，肿瘤的基因治 疗和免疫生物治疗发展迅速，将可能成为肿瘤治疗的新亮 点。肿瘤的免疫治疗不仅能提高宿主的免疫能力，特异性杀 伤肿瘤细胞，而且对正常组织细胞有较少的毒副作用。白细 聚体细胞因子，可促进记忆性T细胞增殖，诱导活化的T细 子，具有较强的免疫调节活性，参与自身免疫性疾病、慢性 炎症反应和某些感染性疾病的发病和调控111。有报道提出， 胞因子的产生而发挥抗肿瘤作用。因此，IL．23作为肿瘤基 因治疗的候选因子越来越受到关注。然而，IL．23抗肿瘤作 用的具体机制还不十分清楚。本研究利用逆转录病毒载体， 将鼠源IL．23基因转入小鼠乳腺癌细胞株MA．891，研究了 中文摘要 IL．23基因对乳腺癌细胞MA一89I体外生长及生物学性状的 影响，为乳腺癌的基因治疗研究提供实验依据。 方法：1IL一23基因转染细胞的构建：将携带mlL一23基 装细胞包装成含IL．23基因的逆转录病毒，利用该病毒将 mlL．23基因导入MA 891细胞，经G418筛选后获得表达 mlL．23的阳性细胞克隆MA891／IL．23。 2 生IFN．Y的情况：用MTT比色法检测肿瘤细胞的体外增殖； 流式细胞仪检测细胞周期以及细胞表面分子CD80、cD86、 MHCI、MHCII、Fas的表达。 结果：1 液中加入含mlL．23基因的重组逆转录病毒，继续培养24h 后，加入G418进行筛选培养，G418抗性的细胞克隆即为 MA891细胞无明显差异(Fig．1)。 2MA891／IL．23细胞中IL．23 生型MA．891细胞中未检测到IL．23 mRNA的表达(Fig|2)。 中文摘要 3 白表达呈阴性(Fig．3)。 4 h后， 未检出mIL-23。 5mIL．23诱导小鼠脾细胞分泌IFN．v的检测：在ConA存在 下，MA891／IL．23细胞培养上清可诱导小鼠脾细胞分泌 IFN吖，产生量为28．5±2．7 0．3 ngm和4．7±0．6 有促进作用。 6 同(Fig．5)。 7细胞表面H．2Kb(MHC CD86以及Fas的表达，三者之间相比均无明显差异 (P0．05)：(Table．1)(Fig．6)。 中文摘要 I、MHC 因在体外对MA891细胞的生物学活性没有影响。 评价IL．23在小鼠体内的抗肿瘤作用奠定了基础。 关键词：细胞因子：IL．23；基因转染：小鼠乳腺癌；脾 细胞 英丈摘要 cancercellline ofmicebreast Construction IL一23 withrecombinant MA891／IL．23 gene ●