腺病毒介导的hr2-sirna联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及spect显像监测研究.pdfVIP

腺病毒介导的 HER2-siRNA 联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及 SPECT 显像监测研究 中文摘要 腺病毒介导的HER2-siRNA 联合顺铂对人卵巢癌移植瘤 的治疗效应及SPECT 显像监测研究 中文摘要 目 的：构建针对 Her2/neu 的RNA 干扰腺病毒载体包装重组腺病毒，观察重组 腺病毒感染移植瘤并联合化疗药物顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗作用，并用 131I-Herceptin 作显像剂，SPECT 显像活体监测腺病毒介导的 HER2-siRNA 对移植瘤 内HER2 表达的干扰效应，为进一步研究卵巢癌的基因治疗奠定实验基础。 方 法：①根据本实验室前期研究已经筛选出干扰效率满意的 HER-2/neu-shRNA 序列，构建及鉴定特异性的 HER2-siRNA 腺病毒载体及一条随机序列的阴性对照腺病 毒载体。②将上述载体经 Lipofectamine2000 转染到 HEK293 细胞中，采用 AdMax 腺 病毒包装系统进行腺病毒的包装，并通过 Adeno-X™ Virus Purification Kit 方法纯化 腺病毒，运用终点稀释法测定腺病毒滴度。③卵巢癌 SKOV-3 细胞接种 BALB/c 裸鼠 后随机分组进行治疗实验：瘤内及瘤周注射特异性的 HER2-siRNA 腺病毒 （Ad-HER2-RNAi 组）、阴性腺病毒（NC 组）及 PBS （CON 组），检测各组瘤体大小、 瘤体重量、免疫组化测定各组HER2 蛋白表达，利用 131I- 曲妥珠单克隆抗体（Herceptin ） 分别对荷卵巢癌移植瘤裸鼠进行 SPECT 放射免疫显像，研究裸鼠间隔 15 天的两次重 复显像、不同剂量的 131I-Herceptin 显像变化及计算各实验组肿瘤/本底（T/B ）比值。 ④荷卵巢癌移植瘤裸鼠随机分五组进行联合治疗实验：特异性的 HER2 -siRNA 腺病 毒和顺铂（Ad-HER2-RNAi+DDP 组）、特异性的 HER2 -siRNA 腺病毒和生理盐水 （Ad-HER2-RNAi 组）、PBS 和顺铂（DDP 组）、阴性腺病毒和生理盐水（NC 组）、 PBS 和生理盐水（CON 组），每组的 DDP 和生理盐水是腹腔注射给药，其余为瘤内 及瘤周注射。检测各组裸鼠体重、瘤体大小、瘤体重量、免疫组化测定各组 HER2 蛋白表达，利用 131I-Herceptin 对每组裸鼠进行 SPECT 放射免疫显像，分析图像变化， 计算各组肿瘤/本底（T/B ）比值。 结 果：①成功构建 HER2-siRNA 干扰序列及随机序列的腺病毒穿梭质粒， 测序证实序列正确。②重组腺病毒成功包装，获得了高滴度 1×1011 PFU/mL 的腺病毒。 I 中文摘要 腺病毒介导的HER2-siRNA 联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及 SPECT 显像监测研究 ③Ad-HER2-RNAi 组移植瘤与 CON 组和 NC 组相比，平均瘤体积、瘤体重量均明显 减小（P ＜0.05 ）；免疫组化结果亦证实 Ad-HER2-RNAi 组 HER2 蛋白的表达明显下 调；各组裸鼠经尾静脉注射 131I-Herceptin 后 1h 即可见移植瘤部位显影，瘤体影像随 时间延长显影逐渐清晰，间隔 15d 裸鼠重复显像无明显差异，不同剂量显像剂对图像 无明显影像，因而后续实验选择中等剂量7.4MBq 的131I-Herceptin 作为每次显像用量； 比较各时间点T/B 值及经组织厚度校正后的 T/B 值，Ad-HER2-RNAi 组与 CON 组和 NC 组比较，差异均具有统计学意义（P ＜0.01 ）。④联合治疗实验结果显示：与CON 组和 NC 组比较，Ad-HER2-RNAi 组和 DDP 组和 Ad-HER2-RNAi+DDP 组裸鼠移植 瘤的平均瘤体积和重量明显下降（均 P ＜0.01 ），其中以后者更明显。免疫组化结果显 示上述三组 HER2 蛋白的表达均下调，联合用药组更明显。SPECT 显像结果示三组 治疗组各时间点 T/B 原始比值及 T/B 校正值均低于 CON 组和 NC 组，差异有统计学 意义（均P ＜0.01 ）。Ad