几丁糖对扩张后瓣纤维包膜影响的实验研究.pdfVIP

中文摘要 几丁糖对扩张后皮瓣纤维包膜影响的实验研究 摘 要 目的：通过观察几丁糖应用前后纤维包膜厚度、毛细血 管数量、胶原蛋白含量及成纤维细胞微细结构等的变化规 律，阐明几丁糖在扩张器植入术后纤维包膜形成过程中，对 成纤维细胞向成肌纤维细胞转化以及胶原纤维的合成与分 泌所产生的影响，从而揭示几丁糖干预纤维包膜形成的作用 机理，为临床解决皮肤软组织扩张术中因纤维包膜挛缩而导 致扩张后皮瓣利用率降低这一难题寻求一种新的可行方法 提供理论依据。 方法： 1实验动物 实验用新西兰大白兔15只雌雄不限，体重近似，称重 编号。 2分组 每只新西兰大白兔背部中段脊柱两侧旁开3cm处，皮下 浅筋膜深层剥离足够大腔隙，两侧各埋植20ml皮肤软组织 扩张器一枚：均将左侧设为实验组，右侧设为对照组。 3扩张器植入及注水方法 实验组在腔隙剥离到位后，观察无活动性出血，将2％ 医用几丁糖0．5ml注入腔隙内，使其涂布均匀，再植入20ml 皮肤软组织扩张器一枚；对照组常规植入20ml皮肤软组织 扩张器一枚。待实验动物切口愈合拆线后开始扩张注水，扩 张方法采用常规扩张：无麻醉状态下注水，视情况3—5天注 中文摘要 水扩张一次，每次注水量根据皮瓣张力大小而定，以皮瓣指 压反应4～5秒为限；同一只新西兰大白兔的实验侧与对照侧 每次注水量相同。每只20ml皮肤软组织扩张器注水达到 40ml后停止注水。 4取材 于停止注水10天后，以10％水合氯醛(8ml／kg)腹腔注 射，在全身麻醉状态下，切取实验组和对照组扩张器表面相 同部位纤维包膜及相同部位4cmx4cm大小带纤维包膜皮瓣。 切取的带纤维包膜皮瓣标本置于滴有液体石蜡的玻片表面， 在其自然回缩的第5min照相，用图像分析法计算各组织块 收缩率；在取下的大块纤维包膜标本上切取约0．1cmx0．3cm 大小的组织块，以4％中性戊二醛固定，送透射电镜切片观 察；剩余部分平铺于无菌纱布上，丝线缝合固定标本四角后， 连同无菌纱布一起浸入中性甲醛固定液，用于制作石蜡切片 后分别作常规HE染色、Masson染色和免疫组化CD34染色。 5观测指标 (1)收缩率：带纤维包膜的皮瓣标本收缩前均为 析法计算各组织块收缩率【1】。对比观察实验组和对照组扩张 后带纤维包膜皮瓣的收缩率变化。(2)光镜下观察常规HE 染色切片的组织学变化，并应用纤维标尺测量标本纤维包膜 厚度；光镜下观察Masson染色切片，比较实验组和对照组 标本中胶原纤维的含量变化，并应用病理图像分析系统对染 色标本进行平均灰度的定量分析，以量化两组中胶原纤维含 量对比；光镜下观察CD34染色切片，比较实验组和对照组 纤维包膜中毛细血管数量的变化。(3)透射电镜下观察实验 中文摘要 组和对照组标本成纤维细胞内的细胞器和微丝的变化，以对 比两组中成纤维细胞分泌胶原的能力及两组中成纤维细胞 向成肌纤维细胞转化程度的差异。 6统计学处理 应用SPASSll．5统计学处理软件，对实验结果进行统计 学处理。 结果： 1收缩率 实验组收缩率为43．371_+7．312％，对照组收缩率为 45．637_+6．613％两组比较有统计学差异(p0．05)。 2光镜观察 2．1HE染色及纤维包膜厚度测定 镜下可见实验组与对照组中均有大量的成纤维细胞，并 有新生薄壁的毛细血管散在于视野中；实验组中幼稚期的成 纤维细胞数目明显比对照组多，可见幼稚期的成纤维细胞胞 体较大，两端常有突起，胞浆因略呈嗜碱性而略显蓝色；而 对照组中成熟期的成纤维细胞即纤维细胞数目明显比实验 组多，可见成熟期的成纤维细胞因合成分泌前胶原蛋白而在 其周围形成胶原纤维，形态呈长梭形，胞浆较少，核较实验 组深染。随机选取实验组与对照组光镜100倍HE染色切片 各15个视野，应用显微标尺测量HE染色切片中纤维包膜的 (P0．05)。 2．2 Masson染色及图像定量分析 光镜下观察Masson染色切片，实验组：纤维包膜厚度 中文摘要 的4／6～5／6呈灰色，其中可见散在的成纤维细胞，核呈灰黑 色，卵圆形，排列疏松；其余