同型半胱氨酸诱实验性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及核因子-κb表达的研究.pdf

／㈣Y1 78删7㈣03㈣1 同型半胱氨酸诱导实验性心力衰竭大鼠心肌细胞 凋亡及核因子．KB表达的研究 研究生：刘斌 专 业：内科学 ：· 导 师：贾如意教授’ 中文摘要 背景 同型半胱氨酸(HCY)是一种含巯基氨基酸，现有临床资料表明血浆同型 半胱氨酸水平升高己被证明是冠心病的独立危险因素，但致病机制尚未完全 明了。国内外尚未有HHCY导致冠心病心衰的研究报道，且导致心衰的发生 机制尚未明确。核因子．1cB(NF．KB)是调节基因转录的重要因子，近来的研 究表明NF．KB在心衰的发生发展中起到了重要的作用，是当前研究的热点。 本研究通过给予Wistar大鼠低、中、高剂量HCY诱导饮食12周后，建立冠 心病心力衰竭模型动物模型，光镜下观察心肌组织形态学变化，用Tunel染 色观察心肌细胞凋亡情况。行EMSA测量心肌组织中的NF．KB，观察高同型 半胱氨酸血症与心衰的相关性，NF一1cB在心衰中的表达。 材料和方法 成年健康Wistar大鼠60只随机分为三组，分别给予低、中、高剂量HCY 诱导饮食约l2周形成不同水平的HHCY。 1．实验过程中观察大鼠的精神、活动、进食、毛色等情况。 2．心肌组织形态学检查：取左室心肌适量大小，常规固定、包埋、HE 染色后行光镜观察。 index，AI)：于左心室心尖部固定部位 3．心肌细胞凋亡指数(apoptotoc 取适量全层心肌组织，按常规病理组织学方法制备心肌石蜡标本，采用脱氧核 糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测凋亡心肌细胞。具 体按照原位凋亡检测试剂盒说明书进行操作。细胞核呈棕黄色或者棕褐色颗 粒特征，判定为凋亡细胞。光镜下根据凋亡阳性细胞分布情况，每张切片拍 摄5个阳性视野，以阳性细胞数所占观察心肌细胞的比例作为凋亡率，即-Ii, 00％。计算心 肌细胞凋亡指数(％)=(凋亡心肌细胞核数／正常心肌细胞核数)×1 肌细胞凋亡指数，应用SPSSl7．0统计学软件分析。 4．从心肌组织中提取核蛋白(具体按照细胞核蛋白提取试剂盒的说明书 进行操作)。应用EMSA测量心肌组织NF—K：B的活性(具体步骤按照凝胶迁 移率分析试剂盒说明进行操作)：①制备聚丙烯酰胺胶和预电泳。②制备结 合反应液。③加样后电泳。④电泳转移反应体系到尼龙膜。⑤交联固定DNA。 ⑥通过化学发光反应检测生物素标记DNA。⑦曝光成像。计算其条带灰度值， 应用SPSSl7．O统计学软件分析。 结果 1．1 2周之后，大鼠心力衰竭模型成功建立。 2．光镜下形态学变化：与对照组相比，模型组心肌损伤程度明显加重。 高剂量组破坏程度比低剂量组严重。其中低、中剂量组具有相似的形态学变 化。 3．与对照组相比(2．90±0．89％)，模型组心肌细胞凋亡指数明显增高 4．1 (P0．01)，高剂量组心肌细胞凋亡指数(17-4-2．73％)明显高于中剂量组 之间无明显差别(P=0．1 39)。 4．与对照组(条带灰度值为272．64±26．51)相比，模型组NF—nB的活 值为780．07±45．34)明显高于中剂量组(条带灰度值为617．61±45．63) (P0．01)，中剂量组(条带灰度值为617．61±45．63)明显高于低剂量组(条 带灰度值为485．00±36．07)(P0．01)。 结论 1．同型半胱氨酸能诱导大鼠心衰，并且心衰的严重程度与喂养大鼠的同 型半胱氨酸的剂量密切相关。 2．心衰组大鼠的NF—K：B活性明显增高，心衰的严重程度与NF．KB活性 密切相关。NF．KB在心衰的过程中可能发挥了重