吡啶甲酸铬对33-l1前脂肪细胞增殖分化及对高糖环境下3t3-l1脂肪细胞固醇调节元件结合蛋白-1表达的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 吡啶甲酸铬对3T3一L1前脂肪细胞增殖分化及对高 糖环境中3T3．L1脂肪细胞固醇调节元件结合蛋白．1表 达的影响 背景 研究发现，补充三价铬(C，)可降低糖尿病患者的血糖和血脂水平，但其确 切的分子机制尚不清楚。铬(Chromium)是人体必需微量元素之一，有多种氧化态， 其中C，为人体所必需，其有机形式吡啶甲酸铬(Chromium picolinate，CrPic) 可在体内发挥最大生物学效应。最近研究表明，3T3．L1脂肪细胞膜上胆固醇含量 可影响葡萄糖转运，当CrPie作用于细胞时，细胞膜胆固醇含量下降，葡萄糖转 4，GLUT4)激活，葡萄糖向细胞内转运增加，外源性 运体4(glucosetransporter 胆固醇回填到细胞膜阻碍了CrPic对GLUT4的激活作用。 element 固醇调节元件结合蛋l刍(sterolregulationbindingprotein，SREBPs)，对 胆固醇、脂肪酸和甘油三酯的合成有重要调控作用。当细胞需要胆固醇时，位于 内质网／高尔基体不成熟形式的SREBP．1分裂，以成熟形式从内质网／高尔基体膜 上释放，在细胞核中与固醇反应原件结合，调节控制胆固醇平衡蛋白的表达。 目 的 本研究旨在进一步探讨C，降低血糖的分子机制，讨论不同浓度CrPic对 3T3．L1前脂肪细胞增殖、分化的影响以及对高糖环境下3T3-L1脂肪细胞中 胆固醇水平，参与葡萄糖向细胞内的转运。 方法 用含10％胎牛血清的IMDM培养基培养3T3．L1前脂肪细胞，长满80％时传 代，转种于96孔板(细胞密度为5x104个／m1)，常规培养12h，换以用IMDM培 测不同浓度Crpic对3T3．L1前脂肪细胞增殖活力的影响。将3T3-L1前脂肪细胞接 种于24孔培养板(细胞密度为5×104个／m1)，待细胞融合2d后用于实验。分组： 各组溶液，再培养48h，每2d换培养液一次，一共培养8．12d，用油红O染色法 检测不同浓度Crpic溶液对3T3．L1前脂肪细胞分化的影响。3T3-L1脂肪细胞以每 细胞诱导分化为成熟3T3．L1脂肪细胞，换上含O．2％BSA的IMDM无血清培养基 培养12h，分组：对照组：5．0mmol／L葡萄糖加20mmol／L甘露醇，干预组1： nmol／L、l Ianol／L、1 葡萄糖加不同浓度Crpic(1nmol／L、10 培养16h后用免疫细胞化学法检测各实验组SREBP-1的表达。 结果；口7代 与对照组相比，各浓度实验组OD值相对于空白对照组均降低，其中 10nmol／L、100nmol／L浓度实验组对3T3．L1前脂肪细胞增殖的抑制作用最明显， 细胞增殖活性分别比对照组低11．56％、13．73％，具有显著差异(PO．01)。 诱导分化前的3T3．L1前脂肪细胞呈典型的梭形，胞浆中无脂滴，形态与成纤 维细胞相似。当细胞完全融合后，处于生长停滞，未见处于明显分裂相的细胞， 诱导分化第4天时，细胞变大、变圆，细胞中有脂滴出现。诱导分化第12天时， 前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞，表现为细胞胞浆丰富，含有大量的脂滴，脂 滴分布于核周围，形成“戒指环”结构，为典型的成熟脂肪细胞形态。经不同浓度 Crpic干预后，各浓度实验组细胞与空白对照组相比分化不同程度被抑制，表现为 细胞内脂滴形成减少，其中10nmol／L浓度实验组相对于空白对照组，细胞分化程 度降低37。29％，100nmol／L组降低41，52％。相对于其他浓度实验组分化程度也显 2 著降低，差异具有显著性(PO．01)。 SREBP-1表达于3T3．L1脂肪细胞的胞质与脂肪滴内，DAB染色表现为棕黄 色颗粒，胞核内无着色。干预组2相对于对照组SREBP．1表达均明显升高(Po．01)。 干预组3中的各浓度组与干预组