吡柔比星与温热同治疗胃癌的研究.pdf

吡柔比星与温热协同治疗胃癌的研究 博士研究生：王晓光 指导教师：罗荣城教授 摘要 胃癌占消化道肿瘤死亡人数的～半和各种恶性肿瘤死亡总数的1／5，死亡原 因在于术后患者容易发生腹腔转移和复发。术中、术后彻底消灭腹腔内游离癌 细胞神1微小癌灶是预防复发，提高生存率的关键。腹腔内温热灌注化疗直接作 用于腹腔内复发和转移部位，对预防胃肠道恶性肿瘤根治术后复发有一定作用。 目前，术中、术后腹腔内温热灌注化疗已逐渐成为大多数学者公认的目前治疗 rarubici 进展期胃肠道肿瘤的有效方法。吡柔比星(Pj n，TIll))El@t-要应用 于乳腺癌、小细胞J|『fj癌、白l}|L病和淋巴瘤的全身治疗以及膀胱癌腔内灌注，但 在腹腔内灌注温热化疗方而的研究很少，特别是在术中使用THP进行渝热化疗 方面的研究更少。本课题拟研究吡柔LL生El一-十-胃癌细胞、组织的温热协同效应和 作用机制以及对裸鼠生存的影响。以了解吡柔比星在腹腔灌注化疗中的应用可 能，指导1|fii床应用。 目的：研究吡柔比星和温热协同对胃癌细胞和组织的体外作用，以及对胃癌 细胞的增殖和侵袭的影响，探i：tiltt柔比星和温热协同协同作用机制及对裸鼠生 存率的影响。 方法： 笫一章 吡柔比星与温热协同对胃癌细胞的体外作用研究。(1)人类胃癌 u u g／ml、32g／ml 和氟尿嘧啶(5FU)处理进行实验研究。TH|)浓度设定为25 和4()ug／ml，摸索T}IP腹腔灌汩：化疗的最佳作用浓度；(2)在确定合适浓度的 比色法检测纠胞活性，研究T1tP的热效应；(：{)处理温度砹定为43℃利45|。C，4：3 中文摘要 mil3、60min、90 min、45min ℃处理时间为30 min和120min：45。C处理时问30 u 和60min；(4)在37℃和43℃加或不加32g／mlTHP作用后，测定MGC一803细 胞的生长曲线并计算细胞倍增时问，研究THP作用的时问效应：(5)MGC一80：3细 胞经37℃、41℃、43℃、37℃+THP(32u u g／m])、4l℃+TItP(32g／m1)、43℃+THP(32 u 行细胞周期分析；(6)AnnexinV—FITC方法测定细胞凋亡。 第二章吡柔比星与温热协同对胃癌细胞增殖和侵袭的作用研究。(1)对 数生长期MGc一803细胞经37℃或43℃，32ug／mlTHP处理60min后，做软琼脂 克隆形成实验，评价温热化疗协同处理对胃癌细胞的克隆增殖抑制作用；(2) 使用流式细胞仪检测不同处理组的MGC一803细胞PCNA核蛋白的表达水平：(3) EmRNA表达水平；(4) RT—PcR扩增分析不同处理组的MGC一803细胞Cyclin u Transwell小室模型测定37℃或43。C，32g／mlT[IP处理60min后的MGC一803 细胞侵袭潜能。 第三章吡柔比星与温热协同对胃癌组织的体外作用研究。(1)收集病理 学确渗的胃癌手术切除组织36例，建立人肖癌组织体外立体培养作用模型；(2) 癌组织块放入预加培养基培养板中，培养箱37℃培养过夜，第二天加入含有药 u 物的培养基，42℃处理组42℃培养1h，37℃组则不需要。THP浓度设定为32 g／ml，DDP处理浓度为50u