人角膜上皮细胞asl表达的研究.pdfVIP

中文摘要 人角膜上皮细胞FasL表达的研究 摘 要 ．目的：角膜为～“免疫赦免”组织，角膜移植是机体内 成功率最高的器官移植之一。近年来随着对细胞凋亡现象认 识的深入，发现所谓的“免疫赦免”与细胞凋亡有关：与细 胞凋亡相关的Fas和Fas配体(Fas 用在机体免疫豁免和免疫耐受过程中具有重要作用。眼角膜 上皮细胞和内皮细胞能大量表达FasL，刚进入这些细胞和相 应组织周围的免疫细胞和炎症细胞，因为尚未充分激活，无 靶目标，而不能存活，使组织可免受免疫系统的攻击。在角 膜移植中，单就供体植片而言，植片上皮层及内皮层FasL 的表达对于维持免疫赦免状态的作用也是不容忽视的。虽然 角膜移植取得了较高的成功率，但免疫排斥仍是异体角膜及 上皮细胞移植所面临的一大问题。据研究，若能适当提高移 植物FasL表达，则可以减轻移植时的排斥作用，提高移植 耐受性。本实验观察了正常人角膜上皮FasL蛋白的表达情 况；并对正常人角膜缘上皮不同细胞层次FasL蛋白表达情 况进行观察，旨在获得对角膜上皮细胞增殖、分化的进一步 了解：通过对离体培养的人角膜上皮细胞进行强力霉素的药 物干预，评价人角膜上皮细胞FasL蛋白对强力霉素反应的 表达特性，以期能够提高体外培养的角膜上皮细胞FasL的 表达；通过对D—x液中的角膜进行强力霉素干预，研究使离 体保存的角膜FasL表达发生变化实验方法的可行性。通过 中文摘要 以上研究旨在为临床进行角膜缘干细胞移植和角膜移植时 降低免疫排斥率提供理论依据，并增进对角膜上皮增殖分化 的认识。 方法 1对角膜组织进行FasL的免疫组织化学染色，观察其上皮 FasL蛋白的表达情况。 2对角膜缘组织进行FasL的免疫组织化学染色，对比角膜 缘上皮其基底细胞层和其它细胞层FasL的表达有无不同。 3使用S}{EM培养液对人角膜缘组织块进行培养，将培养得 到的角膜上皮细胞随机分为两组，一组换用含200“g／ml强 力霉素的培养液进行培养，另一组不经强力霉素干预，均再 培养24小时，使用流式细胞技术观测24小时后经与未经强 力霉素干预的角膜上皮细胞FasL的表达有无不同。 4在离体条件下，将4℃保存在Dx液(一种角膜中期保存 液)中的角膜植片随机分为两组，一组在Dx液中加入 200ug／ml强力霉素进行干预，另一组不经强力霉素干预， 均再静置保存24小时。对角膜行FasL的免疫组织化学染 色，观察干预24小时与未经干预的角膜其上皮细胞FasL 的表达有无不同。 结果 1 FasL在正常人角膜上皮细胞呈阳性表达，基质中未见FasL 表达。 2正常人角膜缘上皮其基底层细胞FasL的染色强度为 85．71士8．32，经统计学分析有显著性差异(P0．01t_8．203)， 即正常人角膜缘处其基底层细胞FasL的表达高于其它层 中文摘要 细胞FasL的表达。 3对于体外培养的人角膜上皮细胞，未经强力霉素干预的上 学分析有显著性差异，(PO．叭t_．3．783)。即两组细胞中 FasL的荧光指数不同，经强力霉素干预组FasL的荧光指 数高于未经强力霉素干预组。 4对于在Dx液中保存的，经强力霉素处理过的角膜植片上 素处理的角膜植片上皮细胞FasL蛋白的染色强度为 t =0．243)，即两组的角膜上皮层FasL蛋白的表达无差别。 结论 1正常人角膜上皮细胞有FasL蛋白的表达，基质中未见FasL 蛋白表达。 2FasL蛋白在人角膜上皮增殖、分化过程中起着一定的作 用。 3强力霉素可使体外培养的人角膜上皮细胞FasL蛋白的表 达增高，有希望降低临床角膜缘干细胞移植和角膜移植后 的免疫排斥反应，延长植片生存时间，提高移植耐受性。 4体外提高角膜植片FasL蛋白表达的实验方法得到中性实 验结果，但仍为临床角膜移植降低排斥率提供了思路。 关键词： FasL；强力霉素；人角膜上皮细胞；角膜缘； 体外培养；D